Polyclonal Rabbit Anti-PGP 9.5 N.º de código Z 5116

Polyclonal Rabbit
Anti-PGP 9.5
N.º de código Z 5116
Edição de 02.05.03
Utilização prevista
Para utilização em diagnósticos in vitro.
Polyclonal Rabbit Anti-PGP 9.5, N.º de código Z 5116, foi concebido para ser utilizado em imunocitoquímica. O
anticorpo é também excelente para técnicas de imunoprecipitação em gel.
Em imunocitoquímica, os anticorpos do homem podem constituir um instrumento útil para a diferenciação de
tumores neuroendócrinos (1, 2). A identificação diferencial é facilitada pelos resultados obtidos de um painel
de anticorpos. A interpretação dos resultados deve ser feita por um profissional qualificado, dentro do contexto
dos antecedentes clínicos do doente e de outros testes de diagnóstico.
Introdução
A proteína produto do gene (PGP 9.5) é uma proteína citosólica de 24,8 kDa que pertence à subclasse de
hidrolase de terminal C da ubiquitina.
Expressa-se muito nos neurónios vertebrados e nas células
neuroendócrinas, onde constitui 1 a 5% da totalidade de proteínas solúveis (3). PGP 9.5 tem sido verificado
nos adenomas da pituitária, carcinomas medulares da tireóide, tumores de células de ilhas pancreáticas,
paragangliomas, neuroblastomas, e tumores carcinóides numa série de locais (4). PGP 9.5 remove a
ubiquitina das outras proteínas, protegendo-as contra a degradação causada pelas proteases (1).
Reagente fornecido
Fracção purificada de imunoglobulina de anti-soro de coelho fornecida na forma líquida. Em 0,1 mol/L de NaCl
e 15 mmol/L de NaN3.
Concentração da proteína: Ver o rótulo do frasco.
Imunogénio
PGP 9.5 purificada, isolada de cérebro bovino (3).
Especificidade
No immunoblotting do total de proteínas solúveis de cérebro humano, o anticorpo marca uma faixa que
corresponde à PGP 9.5.
2
Na imunoelectroforese cruzada, empregando 12,5 µL de anticorpo por cm de área de gel contra 2 µL de
plasma humano, surge um precipitado fraco, correspondendo à albumina. Coloração: Azul Brilhante de
Coomassie.
Conforme demonstrado por imunocitoquímica, o anticorpo marca a proteína equivalente à PGP 9.5 na ovelha (5).
Precauções
1. Para utilizadores profissionais.
2. Este produto contém azida sódica (NaN3), uma substância química altamente tóxica na forma pura. Em
concentrações de produto, mesmo não classificadas como perigosas, a azida sódica poderá reagir com as
canalizações de chumbo e de cobre, formando acumulações de azidas metálicas altamente explosivas. Ao
descartar, lavar com grandes quantidades de água a pressão, a fim de evitar a acumulação de azidas
metálicas na canalização.
3. Tal como no caso de qualquer produto derivado de fontes biológicas, devem empregar-se processos de
manuseamento apropriados.
4. O produto pode ser utilizado em diferentes técnicas e em combinação com diferentes tipos de amostras e
materiais, pelo que cada laboratório individual deverá validar o sistema de testes aplicado.
Armazenamento
Armazenar entre 2 e 8 ºC. Não utilizar após a data de validade inscrita no frasco. Caso os reagentes sejam
armazenados noutras condições para além das especificadas, o utilizador deve verificar tais condições. Não
há sinais óbvios que indiquem a instabilidade deste produto. Por conseguinte, os controlos positivo e negativo
devem ser processados em simultâneo com as amostras do doente. Caso se observe alguma coloração
inesperada que não possa ser explicada por variações dos procedimentos de laboratório e se suspeite de um
problema com o anticorpo, contactar com o nosso Centro de Assistência Técnica.
Preparação da amostra
Secções de parafina: O anticorpo pode ser usado para marcar secções de tecido envolvidas em parafina e
fixadas em formalina. É necessário o pré-tratamento dos tecidos com a recuperação de epítopos induzida por
calor. Obtêm-se resultados excelentes com Dako Target Retrieval Solution, N.º de código S 1700, com Dako
Target Retrieval Solution, High pH, N.º de código S 3308, com 10 mmol/L de tampão citrato, pH 6,0, ou com 10
mmol/L de tampão Tris, 1 mmol/L EDTA, pH 9,0. Foi estabelecido que o pré-tratamento dos tecidos com
protease K destrói o epítopo. As secções de tecido não devem secar durante o tratamento nem durante o
processo de coloração imunocitoquímica que se segue.
Processo de coloração
Diluição: Polyclonal Rabbit Anti-PGP 9.5, N.º de código Z 5116, pode ser utilizado a uma taxa de diluição de
1:100-1:200, quando aplicado a secções de cérebro humano fixadas em formalina e envolvidas em parafina,
utilizando, durante 20 minutos, a recuperação de epítopos induzida por calor em 10 mmol/L de tampão de
citrato, pH 6.0, bem como 30 minutos de incubação à temperatura ambiente, com o anticorpo primário. As
condições ideais poderão variar, dependendo da amostra e do método de preparação, e devem ser
determinadas por cada laboratório individual. O controlo negativo recomendado é
Dako Rabbit
Immunoglobulin Fraction (Solid-Phase Absorbed), N.º de código X 0936, diluído à mesma concentração de
proteína que o anticorpo primário. A não ser que a estabilidade tenha sido estabelecida no próprio sistema de
(104474-005)
Z 5116/PT/COT/02.05.03 p. 1/2
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testes, recomenda-se a diluição do produto imediatamente antes da sua utilização, ou a sua diluição em Dako
Antibody Diluent, N.º de código S 0809.
Visualização: Recomendam-se o kit DAKO LSAB™+/HRP, N.º de código K 0679, e os kits DAKO
EnVision™+/HRP, N.ºs de código K 4008 e K 4010. Seguir o processo incluído com o kit de visualização
seleccionado.
Limitações específicas
do produto
Características de
desempenho
Pode observar-se um nível fraco e não específico de marcação do epitélio, tecido muscular, tecido conjuntivo e
soro sanguíneo.
As células marcadas pelo anticorpo exibem um padrão de coloração citoplasmático.
Tecidos normais: Pode verificar-se uma marcação positiva nos tecidos nervosos do cérebro, nas células ilhas
do pâncreas e nos tecidos nervosos e células neuroendócrinas do cólon.
Tecidos anormais: O anticorpo marca células tumorais de 2 carcinóides, 2 Schwannomas, 2 astrocitomas, 1
carcinoma de célula pequena pulmonar e 1 mesotelioma.
Referências
1. Wick MR. Immunohistology of neuroendocrine and neuroectodermal tumors. Semin Diagn Pathol
2000;17:194-203.
2. Rode J, Dhillon AP, Doran JF, Jackson P, Thompson RJ. PGP9.5, a new marker for human
neuroendocrine tumours. Histopathology 1985;9:147-58.
3. Piccinini M, Merighi A, Bruno R, Cascio P, Curto M, Mioletti S, et al. Affinity purification and characterization
of protein gene product 9.5 (PGP9.5) from retina. Biochem J 1996;318:711-6.
4. Leong ASY, Cooper K, Leong FJWA. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford
University Press; 1999. p 291-2.
5. Heggebø R, González L, Press CM, Gunnes G, Espenes A, Jeffrey M. Disease-associated PrP in the
enteric nervous system of scrapie-affected Suffolk sheep. J Gen Virol 2003;84:1327-38.
Explicação dos símbolos
(104474-005)
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Dispositivo médico para
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