Monoclonal Mouse

Polyclonal Rabbit
Anti-Human Tau
N.º de código A 0024
Edição de 02.05.03
Utilização prevista
Para utilização em diagnósticos in vitro.
A Polyclonal Rabbit Anti-Human Tau foi concebida para ser utilizada em imunocitoquímica. O anticorpo é
também excelente para técnicas de imunoprecipitação em gel.
Em imunocitoquímica, o anticorpo marca a proteína tau independentemente do estado de fosforilação (3). A
proteína tau encontra-se presente nos axónios dos neurónios do sistema nervoso central e periférico, bem
como nos depósitos filamentosos do tecido cerebral em diversas tauopatias, p. ex. nas redes neurofibrilares da
doença de Alzheimer. A identificação diferencial é facilitada pelos resultados obtidos de um painel de
anticorpos. A interpretação dos resultados deve ser feita por um profissional qualificado, dentro do contexto
dos antecedentes clínicos do doente e de outros testes de diagnóstico.
Introdução
A proteína tau é uma proteína associada ao microtúbulo (MT) presente no cérebro e noutros tecidos neuronais
(1, 2). Expressa-se predominantemente nos axónios, tanto do sistema nervoso central como do periférico, mas
é dificilmente detectável nos astrócitos e oligodendrócitos do sistema nervoso central. No cérebro adulto, a
junção alternativa de 3 exónios gera 6 isoformas tau cujos comprimentos variam de 352 a 441 aminoácidos,
mas só a isoforma tau mais curta é expressa no cérebro fetal. As acumulações intracelulares de filamentos tau
anormais são características num grupo heterogêneo de doenças designadas tauopatias neurodegenerativas;
incluindo a doença de Alzheimer (2). A ligação da tau aos MT está relacionada com o grau de fosforilação, e a
hiperfosforilação da tau pode conduzir à separação da tau dos MT, aumentando desse modo o conjunto de
taus desligadas, que podem então agregar-se em inclusões filamentosas insolúveis. Continuam por elucidar os
mecanismos precisos pelos quais as tau se congregam em filamentos e causam neurodegeneração no
cérebro humano.
Reagente fornecido
Fracção purificada de imunoglobulina de anti-soro de coelho fornecida na forma líquida. Em 0,1 mol/L de NaCl,
15 mmol/L de NaN3.
Concentração da proteína: Ver o rótulo do frasco.
Imunogénio
Proteína tau humana recombinante expressa em E. coli, correspondente à parte terminal C (aminoácidos 243441) contendo as quatro sequências repetidas envolvidas na ligação do microtúbulo.
Especificidade
Em Western blotting de lisados de células Sf9 transfectadas com cDNA de tau humana, o anticorpo marca a
tau independentemente da fosforilação (3).
Em ELISA indirecto, o anticorpo reage com a tau.
Tal como demonstrado por imunocitoquímica, o anticorpo tem reacção cruzada com a proteína equivalente à
tau no ratinho e no rato.
Precauções
1. Para utilizadores profissionais.
2. Este produto contém azida sódica (NaN3), uma substância química altamente tóxica na forma pura. Em
concentrações de produto, mesmo não classificadas como perigosas, a azida sódica poderá reagir com as
canalizações de chumbo e de cobre, formando acumulações de azidas metálicas altamente explosivas. Ao
descartar, lavar com grandes quantidades de água a pressão, a fim de evitar a acumulação de azidas
metálicas na canalização.
3. Tal como no caso de qualquer produto derivado de fontes biológicas, devem empregar-se processos de
manuseamento apropriados.
4. O produto pode ser utilizado em diferentes técnicas e em combinação com diferentes tipos de amostras e
materiais, pelo que cada laboratório individual deverá validar o sistema de testes aplicado.
Armazenamento
Armazenar entre 2 e 8 ºC. Não utilizar após a data de validade inscrita no frasco. Caso os reagentes sejam
armazenados noutras condições para além das especificadas, o utilizador deve verificar tais condições. Não
há sinais óbvios que indiquem a instabilidade deste produto. Por conseguinte, os controlos positivo e negativo
devem ser processados em simultâneo com as amostras do doente. Caso se observem colorações
inesperadas que não possam ser explicadas por variações dos procedimentos de laboratório e se suspeite de
um problema com o anticorpo, contactar com o nosso Centro de Assistência Técnica.
Preparação da amostra
Secções de parafina: O anticorpo pode ser usado para marcar secções de tecido envolvidas em parafina e
fixadas em formalina. Não é necessária a recuperação de epítopos induzida por calor nem o pré-tratamento
dos tecidos com protease K. As secções de tecido não devem secar durante o procedimento de coloração
imunocitoquímica.
Secções congeladas e preparações de células: O anticorpo pode ser usado para marcação de preparados
fixados com metanol (3).
(105559-004)
A 0024/PT/KLI/02.05.03 p. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Processo de coloração
Diluição: A Polyclonal Rabbit Anti-Human Tau, N.º de código A 0024, pode ser usada numa gama de diluição
de 1:100-1:200 quando aplicada em secções de cérebro humano com doença de Alzheimer, fixadas com
formalina e envolvidas em parafina, usando 30 minutos de incubação à temperatura ambiente com o anticorpo
primário. As condições ideais poderão variar, dependendo da amostra e do método de preparação, e devem
ser determinadas por cada laboratório individual. O controlo negativo recomendado é Dako Rabbit
Immunoglobulin Fraction (Solid-Phase Absorbed), N.º de código X 0936, diluído à mesma concentração de
proteína que o anticorpo primário. A não ser que a estabilidade tenha sido estabelecida no próprio sistema de
testes, recomenda-se a diluição do produto imediatamente antes da sua utilização, ou a sua diluição em Dako
Antibody Diluent, N.º de código S 0809.
Visualização: Recomendam-se o kit DAKO LSAB™+/HRP, N.º de código K 0679, e os kits DAKO
EnVision™+/HRP, códigos n.ºs K 4008 e K 4010. No caso de secções congeladas e preparados celulares, o
kit Dako APAAP, N.º de código K 0670, é uma boa alternativa se a coloração da peroxidase endógena for
motivo de preocupação. Seguir o processo incluído com o kit de visualização seleccionado.
Características de
desempenho
Tecidos anormais: Em tecido cerebral de doentes com doença de Alzheimer, as redes neurofibrilares são marcadas
pelo anticorpo. O anticorpo marca a Tau independentemente do estado de fosforilação (3).
Referências
1. Butner KA, Kirschner MW. Tau protein binds to microtubules through a flexible array of distributed weak
sites. J Cell Biol 1991;115:717-30.
2. Trojanowski JQ, Lee VM-Y. The role of tau in Alzheimer's disease. Med Clin N Am 2002;86:615-27.
3. Biernat J, Wu Y-Z, Timm T, Zheng-Fischhöfer Q, Mandelkow E, Meijer L, et al. Protein kinase MARK/PAR1 is required for neurite outgrowth and establishment of neuronal polarity. Mol Biol Cell 2002;13:4013-28.
Explicação dos símbolos
(105559-004)
Número de catálogo
Limites de temperatura
Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
Código de lote
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Fabricante
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