Dako Autostainer/Autostainer Plus

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Thyroglobulin
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Referência IS509
Finalidade
Para utilização em diagnóstico in vitro.
O FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Thyroglobulin, Ready-to-Use, (Dako Autostainer/Autostainer Plus), é indicado
para utilização em imuno-histoquímica em conjunto com instrumentos Dako Autostainer/ Autostainer Plus.
Este anticorpo é útil para a identificação da tiroglobulina no tecido da tiróide e é uma ferramenta útil para
a identificação dos carcinomas da tiróide bem diferenciados (1, 2). A interpretação clínica de qualquer coloração ou
da sua ausência deve ser complementada com estudos morfológicos utilizando controlos adequados e deve ser
avaliada dentro do contexto do historial clínico do doente e através de outros testes de diagnóstico por um
patologista qualificado.
Resumo
e explicação
A tiroglobulina (Tg) é uma glicoproteína com uma forma predominante de um homodímero de 660 kDa. A Tg, o precursor
das hormonas da tiróide, é sintetizada pelos tirócitos e é transportada para a superfície apical onde é segregada para
dentro do lúmen dos folículos da tiróide e armazenada como componente principal do colóide (> 95%). Uma proporção
menor da Tg é encontrada como monómeros de 330 kDa ou como tetrameros. A redução ou degradação das moléculas
de Tg de 660 kDa ou 330 kDa pode levar à formação de polipéptidos mais pequenos, alguns dos quais estão presentes
em vestígios de quantidades no colóide. Na interface do célula-colóide ocorrem modificações pós-transicionais da Tg,
caracterizadas pela ligação dos resíduos de tirosil ao iodeto, levando à formação de resíduos da hormona da tiróide ao
nível da molécula da Tg. A libertação hormonal requer, geralmente, a absorção da Tg do colóide através da clivagem
proteolítica e dos tirócitos ao longo da via lisossomal (3).
Consultar as Instruções Gerais para Coloração Imuno-histoquímica da Dako ou as instruções do sistema de
detecção quanto aos procedimentos de IHC para obter informação sobre: 1) Princípio do procedimento, 2) Materiais
necessários, mas não fornecidos, 3) Conservação, 4) Preparação das amostras, 5) Procedimento de coloração,
6) Controlo de qualidade, 7) Resolução de problemas, 8) Interpretação da coloração, 9) Limitações gerais.
Reagente fornecido
Anticorpo policlonal de coelho pronto a utilizar, fornecido na forma líquida num tampão com proteína estabilizadora
e 0,015 mol/L de NaN3.
Imunogénio
Tiroglobulina humana isolada a partir de glândulas da tiróide humanas.
Especificidade
O anticorpo marca a Tg humana. Os vestígios de anticorpos contaminantes foram removidos através de absorção
por fase sólida com proteínas de plasma humano.
Na imunoelectroforese cruzada utilizando 12,5 µL de anticorpo concentrado por cm2 de área de gel contra 2 µL de
extracto de glândula da tiróide humana, só aparece um precipitado correspondente à Tg. Com 2 µL de plasma
humano, não aparece precipitado. Coloração: Coomassie Brilliant Blue.
Nas culturas de células da tiróide humana, o anticorpo marca a Tg intracelular (4).
Precauções
1. Para utilizadores profissionais.
2. Este produto contém azida de sódio (NaN3), um produto químico altamente tóxico na forma pura. Em situações
de concentração do produto, embora não sendo classificada como perigosa, a azida de sódio pode reagir com
as canalizações de chumbo e de cobre, formando acumulações de azidas metálicas altamente explosivas.
Ao eliminar o produto, adicionar água abundante para evitar a acumulação de azidas metálicas na canalização.
3. Tal como acontece com qualquer produto de origem biológica, deverão utilizar-se procedimentos
de manuseamento adequados.
4. Usar equipamento de protecção pessoal adequado para evitar o contacto com a pele e os olhos.
5. A solução não utilizada deverá ser eliminada em conformidade com as regulamentações locais e nacionais.
Conservação
Conservar entre 2–8ºC. Não utilizar após o fim do prazo de validade impresso no frasco. Se os reagentes forem
conservados em condições diferentes das especificadas, o utilizador deverá verificar essas mesmas condições.
Não existem sinais óbvios que indiquem a instabilidade deste produto. Por isso, devem processar-se controlos
positivos e negativos simultaneamente com as amostras do doente. Caso se observe uma coloração inesperada
que não possa ser explicada pela variação nos procedimentos laboratoriais e se suspeite da existência de um
problema com o anticorpo, contactar a Assistência Técnica da Dako.
Preparação
das amostras
incluindo materiais
necessários, mas
não fornecidos
O anticorpo pode ser utilizado para marcar secções de tecido fixadas em formol e impregnadas em parafina. As
amostras de tecidos devem ser cortadas em secções de aproximadamente 4 µm.
É necessário proceder ao pré-tratamento com recuperação do epítopo induzida por calor (HIER) utilizando Dako PT
Link (Referência PT100/PT101). Para informações detalhadas, consultar o Guia do Utilizador PT Link. Obtêm-se
resultados óptimos ao pré-tratar os tecidos com FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Referência
K8010/K8004).
Secções impregnadas em parafina: É recomendado o pré-tratamento das secções de tecido fixado em formol e
impregnado em parafina utilizando o procedimento de preparação de amostras 3 em 1 para o Dako PT Link. Seguir
(116669-002)
IS509/PT/MNI/2009.12.04 p. 1/3
os procedimentos de pré-tratamento delineados no folheto informativo do EnVision FLEX Target Retrieval
Solution, High pH (50x) (Referência K8010/K8004). Nota: Após a coloração, as secções têm de ser desidratadas,
limpas e montadas com um meio de montagem permanente.
Secções desparafinizadas: É recomendado o pré-tratamento das secções desparafinizadas de tecido fixado em
formol e impregnado em parafina utilizando o Dako PT Link e seguindo o mesmo procedimento tal como descrito
para as secções impregnadas em parafina. Após a coloração, as lâminas devem ser montadas utilizando um meio
de montagem aquoso ou permanente.
As secções de tecido não devem secar durante o tratamento ou durante o processo de coloração imunohistoquímica seguinte. Para uma maior aderência das secções de tecido às lâminas de vidro, recomenda-se a
utilização de FLEX IHC Microscope Slides (Referência K8020).
Procedimento
de coloração
incluindo materiais
necessários, mas
não fornecidos
O sistema de visualização recomendado é o EnVision FLEX, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(Referência K8010). As etapas de coloração e os tempos de incubação são pré-programados no software dos
instrumentos Dako Autostainer/Autostainer Plus, utilizando os seguintes protocolos:
Modelo de protocolo: FLEXRTU2 (200 µL de volume de dispensa) ou FLEXRTU3 (300 µL de volume de dispensa)
Autoprogram: SMActin (sem contrastação) ou SMActinH (com contrastação)
Em processos de coloração com ≤10 lâminas, a etapa auxiliar deve ser definida para "tampão de lavagem".
Para processos de coloração com > de 10 lâminas, a etapa auxiliar deve ser definida para "nenhuma". Isto assegura
tempos de lavagem comparáveis.
Todas as etapas de incubação devem ser realizadas à temperatura ambiente. Para mais detalhes, consultar
o Manual do Operador para o respectivo instrumento. Se os protocolos não estiverem disponíveis no instrumento
Dako Autostainer utilizado, contactar o Serviço Técnico da Dako.
As condições ideais poderão variar dependendo das amostras e dos métodos de preparação, devendo ser
determinadas por cada laboratório. Se o patologista que procede à avaliação pretender uma intensidade
de coloração diferente, pode ser contactado um Especialista de Aplicações/Especialista do Serviço Técnico
da Dako, para se obterem informações acerca da re-programação do protocolo. Certificar-se de que o desempenho
do protocolo ajustado ainda é válido, avaliando se o padrão de coloração é idêntico ao padrão de coloração descrito
nas "Características de desempenho".
Recomenda-se a contrastação em hematoxilina com o EnVision FLEX Hematoxylin (Dako Autostainer/Autostainer
Plus) (K8018). É recomendado um meio de montagem não aquoso e permanente.
Os controlos positivos e negativos devem processar-se simultaneamente com o mesmo protocolo das amostras
do doente. O tecido de controlo positivo deve incluir a tiróide e as células/estruturas devem apresentar padrões
de reacção conforme os descritos para este tecido nas "Características de desempenho" em todas as amostras
positivas. O reagente de controlo negativo recomendado é o FLEX Negative Control, Rabbit (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (Referência IS600).
Interpretação
da coloração
O padrão de coloração celular é citoplásmico no lúmen dos folículos da tiróide e superfície apical do tirócitos.
Características
de desempenho
Tecidos normais: O anticorpo marca a Tg nos folículos da tiróide e na superfície apical dos tirócitos. A tiroglobulina
é observada em células foliculares da tiróide e, em menor grau, no tecido intersticial e estroma da tiróide devido
a derrames normais.
Tecidos anormais: Nas glândulas hiperplásicas, a tiroglobulina foi detectada em folículos e células glandulares
de folículos mais pequenos. O anticorpo marca os carcinomas medulares produtores de hormonas múltiplas,
papilares e foliculares e (5-7). A tiroglobulina também foi detectada nos carcinomas das células claras foliculares
ao passo que outros neoplasmas de células claras não foram marcados (5, 8). Algumas células anaplásicas
fusiformes e células de carcinoma de células gigantes também são reactivas. Os sarcomas ou carcinomas
metastásicos são negativos (5).
Referências
1. Albores-Saavedra J, Nadji M, Civantos F, Morales AR. Thyroglobulin in carcinoma of the thyroid: An
immunohistochemical study. Hum Pathol 1983;14:62-6.
2. Burt AD, Kerr DJ, Brown IL, Boyle P. Lymphoid and epithelial markers in small cell anaplastic thyroid tumors. J
Clin Pathol 1985;38:893-6.
3. Marinò M, McLuskey RT. Role of thyroglobulin endocytic pathways in the control of thyroid hormone release. Am
J Physiol Cell Physiol 2000;279:1295-1306.
4. Kayser L, Olsen BE, Høyer PE. Quantitative cytochemical demonstration of intracellular thyroglobulin in cultured
human thyrocytes. Effects of fixatives, TSH and interleukin-1α. Histochem J 1991;23:235-40.
5. Albores-Saavedra J, et al. Thyroglobulin in carcinoma of the thyroid. An immunohistochemical study. Hum Pathol
1983; 14:62
6. LiVolsi V, et al. Anaplastic thyroid tumors. Amer J Clin Pathol 1987; 87:434
7. Holm R, et al. Medullary thyroid carcinoma with thyroglobulin immunoreactivity. A special entity? Lab Invest
1987; 57:258
8. Civantos F, et al. Clear cell variant of thyroid carcinoma. Amer J Surg Pathol 1984; 8:187
(116669-002)
IS509/PT/MNI/2009.12.04 p. 2/3
Explicação dos símbolos
(116669-002)
Número de catálogo
Limite da temperatura
Utilizar até
Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
Conteúdo suficiente para <n>
testes
Fabricante
Consultar as instruções de
utilização
Código do lote
IS509/PT/MNI/2009.12.04 p. 3/3