Monoclonal Mouse

FLEX
Polyclonal Guinea Pig
Anti-Insulin
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Referência IS002
Finalidade
Para utilização em diagnóstico in vitro.
O FLEX Polyclonal Guinea Pig Anti-Insulin, Ready-to-Use (Dako Autostainer/Autostainer Plus), é indicado para
utilização em imuno-histoquímica em conjunto com instrumentos Dako Autostainer/Autostainer Plus. Este
anticorpo marca a insulina e as células produtoras de insulina em tecidos normais e neoplásicos. A interpretação
clínica de qualquer coloração ou da sua ausência deve ser complementada com estudos morfológicos utilizando
controlos adequados e deve ser avaliada dentro do contexto do historial clínico do doente e através de outros
testes de diagnóstico por um patologista qualificado.
Resumo
e explicação
A insulina é uma das sete hormonas polipeptídicas conhecidas produzidas no pâncreas. A insulina, segregada
pelas células B dos ilhéus de Langerhans, participa na utilização de glucose, síntese de proteínas e na formação
e armazenamento de lípidos neutros(1). Para mais informações sobre a detecção de insulina e tumores
pancreáticos, consulte as referências (2-7).
Consultar as Instruções Gerais para Coloração Imuno-histoquímica da Dako ou as instruções do sistema de
detecção quanto aos procedimentos de IHC para obter informação sobre: 1) Princípio do procedimento,
2) Materiais necessários, mas não fornecidos, 3) Conservação, 4) Preparação das amostras, 5) Procedimento
de coloração, 6) Controlo de qualidade, 7) Resolução de problemas, 8) Interpretação da coloração, 9) Limitações
gerais.
Reagente fornecido
Anticorpo policlonal de porquinho-da-índia pronto a utilizar, fornecido na forma líquida num tampão com proteína
estabilizadora e 0,015 mol/L de azida de sódio.
Imunogénio
Insulina pancreática porcina.
Especificidade
O anticorpo apresenta reactividade cruzada com a insulina de diversas espécies de mamíferos. A especificidade,
conforme determinada por radioimunoensaio, foi de 100% para insulina humana, 100% para insulina de suíno e
inferior a 0,05% para glucagon e hormona de crescimento humana. Este produto é ideal para utilização em
tecidos humanos.
Precauções
1.
2.
3.
4.
5.
Para utilizadores profissionais.
Este produto contém azida de sódio (NaN3), um produto químico altamente tóxico na forma pura. Em
situações de concentração do produto, embora não sendo classificada como perigosa, a azida de sódio
pode reagir com as canalizações de chumbo e de cobre, formando acumulações de azidas metálicas
altamente explosivas. Ao eliminar o produto, adicionar água abundante para evitar a acumulação de azidas
metálicas na canalização.
Tal como acontece com qualquer produto de origem biológica, deverão utilizar-se procedimentos de
manuseamento adequados.
Usar equipamento de protecção pessoal adequado para evitar o contacto com a pele e os olhos.
A solução não utilizada deverá ser eliminada em conformidade com as regulamentações locais e nacionais.
Conservação
Conservar entre 2–8 °C. Não utilizar após o fim do prazo de validade impresso no frasco. Se os reagentes forem
conservados em condições diferentes das especificadas, o utilizador deverá verificar essas mesmas condições.
Não existem sinais óbvios que indiquem a instabilidade deste produto. Por isso, devem processar-se controlos
positivos e negativos simultaneamente com as amostras do doente. Caso se observe uma coloração inesperada
que não possa ser explicada pela variação nos procedimentos laboratoriais e se suspeite da existência de um
problema com o anticorpo, contactar a Assistência Técnica da Dako.
Preparação das
amostras
incluindo materiais
necessários, mas não
fornecidos
O anticorpo pode ser utilizado para marcar secções de tecido fixadas em formol e impregnadas em parafina.
As amostras de tecido devem ser cortadas em secções de aproximadamente 4 µm.
É necessário proceder ao pré-tratamento com recuperação do epítopo induzida por calor (HIER). Obtêm-se
resultados óptimos ao pré-tratar os tecidos fornecidos com EnVision FLEX™ Target Retrieval Solution, High pH
(10x), (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (Referência K8010/K8014).
Secções desparafinizadas: É recomendado o pré-tratamento das secções desparafinizadas de tecido fixado em
formol e impregnado em parafina utilizando o Dako PT Link (Referência PT100/PT101). Para informações
detalhadas, consultar o Guia do Utilizador PT Link.
Seguir os procedimentos de pré-tratamento delineados no folheto informativo do EnVision FLEX™ Target
Retrieval Solution, High pH (10x), (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (Referência K8010/K8014). Para o PT
Link, devem ser utilizados os seguintes parâmetros: Temperatura de pré-aquecimento: 65 °C; temperatura e
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tempo da recuperação do epítopo: 97 °C durante 20 (±1) minutos; arrefecer até 65 °C. Retirar cada suporte de
lâminas Autostainer com as lâminas do tanque do PT Link e mergulhar, imediatamente, as lâminas num
frasco/tanque (por exemplo, PT Link Rinse Station, Referência PT109) com EnVision FLEX™ Wash Buffer (10x),
(Dako Autostainer/Autostainer Plus) (Referência K8010), diluído e à temperatura ambiente. Deixar as lâminas
em Wash Buffer durante 1-5 minutos.
Secções impregnadas em parafina: Como uma alternativa à preparação das amostras, a desparafinização
e a recuperação do epítopo podem ser realizadas no PT Link, utilizando um procedimento modificado. Para
obter instruções, consultar o Guia do Utilizador PT Link. Após a conclusão do procedimento de coloração, as
secções têm de ser desidratadas, limpas e montadas com um meio de montagem permanente.
As secções de tecido não devem secar durante o tratamento ou durante o processo de coloração imunohistoquímico seguinte. Para uma maior aderência das secções de tecido às lâminas de vidro, recomenda-se a
utilização de Dako Silanized Slides (Referência S3003).
Procedimento de
coloração
incluindo materiais
necessários, mas não
fornecidos
O sistema de visualização recomendado é o EnVision™ FLEX, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(Referência K8010). As etapas de coloração e os tempos de incubação estão pré-programados no software dos
instrumentos Dako Autostainer/Autostainer Plus, utilizando os seguintes protocolos:
Modelo de protocolo: FLEXRTU2 (200 µL volume de dispensa) ou FLEXRTU3 (300 µL volume de dispensa)
Autoprogram: Insulin (sem contrastação) ou InsulinH (com contrastação)
Em processos de coloração com ≤10 lâminas, a etapa auxiliar deve ser definida para “tampão de lavagem”. Para
processos de coloração com > de 10 lâminas, a etapa auxiliar deve ser definida para “nenhuma”. Isto assegura
tempos de lavagem comparáveis. Todas as etapas de incubação devem ser realizadas à temperatura ambiente.
Para mais detalhes, consultar o Manual do Operador para o respectivo instrumento. Se os protocolos não
estiverem disponíveis no instrumento Dako Autostainer utilizado, contactar o Serviço Técnico da Dako.
As condições ideais poderão variar dependendo das amostras e dos métodos de preparação, devendo ser
determinadas por cada laboratório. Se o patologista que procede à avaliação pretender uma intensidade de
coloração diferente, pode ser contactado um Especialista de Aplicações/Especialista do Serviço Técnico da
Dako, para se obterem informações acerca da re-programação do protocolo. Certificar-se de que o desempenho
do protocolo ajustado ainda é válido, avaliando se o padrão de coloração é idêntico ao padrão de coloração
descrito nas “Características de desempenho”.
Recomenda-se a contrastação em hematoxilina com o EnVision™ FLEX Hematoxylin, (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (Referência K8018). É recomendado um meio de montagem não aquoso e
permanente.
Os controlos positivos e negativos devem processar-se simultaneamente com o mesmo protocolo das amostras
do doente. O tecido de controlo positivo deve incluir pâncreas e as células/estruturas devem apresentar padrões
de reacção conforme os descritos para este tecido nas “Características de desempenho” em todas as amostras
positivas. O reagente de controlo negativo recomendado é o FLEX Negative Control, Rabbit (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (Referência IS600).
Interpretação
da coloração
O padrão de coloração celular é citoplásmico.
Características
de desempenho
Tecidos normais: Este anticorpo marca o citoplasma das células B produtoras de insulina. Aproximadamente
60–80% das células normais dos ilhéus são células B.
Tecidos anormais: Verificou-se a marcação dos tumores das células dos ilhéus produtoras de insulina, das
células dos ilhéus hiperplásicas e das células dos ilhéus originárias nos dúctulos pancreáticos (8). Os tumores
mesenquimatosos não são marcados.
Referências
(118570-001)
1.
Sternberger LA. In: Immunocytochemistry, 2nd ed. New York: John Wiley and Sons 1979;8.
2.
Heitz PU, Kasper M, Polak JM, Kloppel G. Pancreatic endocrine tumors: immunocytochemical analysis of
125 tumors. Hum Pathol 1982: 13:263-71.
3.
Creutzfeldt W. Endocrine tumors of the pancreas. In: Diabetic Pancreas. Bruno WE, et al., editors. New
York: Plenum Press 1977:551.
4.
Creutzfeldt W, et al. Insulinomas and gastrinomas. In: Gut Hormones. Bloom SR, Grossmann MI, editors.
Edinburgh: Churchill Livingstone, 1978; 96:589.
5.
Creutzfeldt W. Endocrine tumors of the pancreas. Clinical, chemical and morphological findings.
In Fitzgerald PJ, Morrison AB, editors. The Pancreas. Baltimore: William & Wilkins 1980;208.
6.
7.
Larsson L. Endocrine pancreatic tumors. Hum Pathol 1978; 9:401-16.
Freisen SR. Tumors of the endocrine pancreas. N Eng J Med 1982; 306:580.
8.
Weidenheim KM, Hinchey WW, Campell WG Jr. Hyperinsulinemic hypoglycemia in adults with islet-cell
hyperplasia and degranulation of exocrine cells of the pancreas. Amer Clin Pathol 1983;79:14-24.
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Edição 04/08
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