Monoclonal Mouse Anti-Human B-Cell-Specific Activator

Monoclonal Mouse
Anti-Human
B-Cell-Specific Activator Protein
Clone DAK- Pax5
Referência M7307
Finalidade
Para utilização em diagnóstico in vitro.
O Monoclonal Mouse Anti-Human B-Cell-Specific Activator Protein, Clone DAK-Pax5 destina-se à utilização em
imuno-histoquímica. Os anticorpos contra a proteína activadora específica de linfócitos B pode ser útil para a
identificação de pró-linfócitos B, pré-linfócitos B e linfócitos B maduros e para a classificação dos linfomas (1–4).
Juntamente com um painel de anticorpos, é particularmente útil na identificação diferencial da doença de Hodgkin
clássica versus linfoma de grandes células anaplásico de tipo celular T e nulo (1, 3). A interpretação clínica de
qualquer coloração ou da sua ausência deve ser complementada com estudos morfológicos utilizando controlos
adequados e deve ser avaliada dentro do contexto do historial clínico do doente e através de outros testes de
diagnóstico por um patologista qualificado.
Sinónimos
de antigénio
BSAP, Pax5, NF-HB, Sα-BP, NFSµ-B1, LR1 e EBB-1 (2, 4).
Resumo
e explicação
O BSAP, também conhecido como paired box protein 5 (Pax5), é um factor de transcrição expresso em linfócitos B.
O BSAP é um membro da família de genes PAX que codifica os factores de transcrição envolvidos no
desenvolvimento dos linfócitos B. O BSAP é expresso em pró-linfócitos B, pré-linfócitos B e linfócitos B maduros,
mas não em plasmócitos (3, 4). A disrupção com alvo do gene BSAP, no ratinho, bloqueia o desenvolvimento dos
linfócitos B no estadio de pró-linfócitos B, sugerindo um papel para o BSAP no controlo do desenvolvimento dos
linfócitos B (2). Durante a embriogénese, a expressão de BSAP é expressa, de forma transitória, no
desenvolvimento do sistema nervoso central. Mais tarde, a expressão de BSAP é detectada no fígado fetal, onde se
correlaciona com o início a linfopoiese B. Por conseguinte, o BSAP poderá desempenhar não só um importante
papel no desenvolvimento dos linfócitos B mas também no desenvolvimento neural (1, 3, 5).
Em imuno-histoquímica, pode ser difícil de distinguir o linfoma de Hodgkin clássico (CHL) do linfoma de grandes células
anaplásico de tipo celular T e nulo (1). No CHL, as células de Hodgkin e Reed-Sternberg (células HRS) exprimem
BSAP, enquanto que as células HRS não apresentam, na sua maioria, antigénios dos linfócitos B, tais como CD19 ou
CD20 (6). O BSAP é um marcador útil para o diagnóstico de linfoma B não Hodgkin e linfoma de Hodgkin e de tumores
neuroendócrinos (1-4, 6-8), apesar da sua expressão em subconjuntos de doenças malignas epiteliais (7).
Consultar as Instruções Gerais para Coloração Imuno-histoquímica da Dako ou as instruções do sistema de
detecção quanto aos procedimentos de IHC para obter informação sobre: 1) Princípio do procedimento, 2) Materiais
necessários, mas não fornecidos, 3) Conservação, 4) Preparação das amostras, 5) Procedimento de coloração,
6) Controlo de qualidade, 7) Resolução de problemas, 8) Interpretação da coloração, 9) Limitações gerais.
Reagente fornecido
Anticorpo monoclonal de ratinho fornecido na forma líquida como sobrenadante da cultura de células, dialisado em
0,05 mol/L de Tris/HCl, pH 7,2, e contendo 0,015 mol/L de azida de sódio.
Clone: DAK-Pax5. Isotipo: IgG1, kappa.
Concentração de lgG de ratinho mg/L: consultar a etiqueta do frasco.
A concentração de proteína pode variar entre lotes sem influenciar a diluição ideal. O título de cada lote individual é
comparado e ajustado face a um lote de referência visando garantir um desempenho consistente da coloração
imuno-histoquímica entre lotes.
Imunogénio
Péptido 17-mérico sintético originário do domínio inibitório terminal C da proteína.
Especificidade
Na análise Western Blotting de lisados de células esplénicas de ratinho, o anticorpo marca uma proteína de 55 kDa
correspondente ao BSAP.
Precauções
1. Para utilizadores profissionais.
2. Este produto contém azida de sódio (NaN3), um produto químico altamente tóxico na forma pura. Em situações
de concentração do produto, embora não sendo classificada como perigosa, a azida de sódio pode reagir com
as canalizações de chumbo e de cobre, formando acumulações de azidas metálicas altamente explosivas.
Ao eliminar o produto, adicionar água abundante para evitar a acumulação de azidas metálicas na canalização.
3. Tal como acontece com qualquer produto de origem biológica, deverão utilizar-se procedimentos de manuseamento
adequados.
4. Usar equipamento de protecção pessoal adequado para evitar o contacto com a pele e os olhos.
5. A solução não utilizada deverá ser eliminada em conformidade com as regulamentações locais e nacionais.
Arrumação
Conservar entre 2–8 °C. Não utilizar após o fim do prazo de validade impresso no frasco. Se os reagentes forem
conservados em condições diferentes das especificadas, o utilizador deverá verificar essas mesmas condições. Não
existem sinais óbvios que indiquem a instabilidade deste produto. Por isso, devem processar-se controlos positivos
e negativos simultaneamente com as amostras do doente. Caso se observe uma coloração inesperada que não
possa ser explicada pela variação nos procedimentos laboratoriais e se suspeite da existência de um problema com
o anticorpo, contactar a Assistência Técnica da Dako.
(119106-001)
M7309/PT/THO/12.06.08 p. 1/3
Dako Denmark A/S
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Preparação das
amostras incluindo
materiais necessários,
mas não fornecidos
Secções de parafina:
O anticorpo pode ser utilizado para marcar secções de tecido impregnadas em parafina, fixadas em formol.
É necessário proceder ao pré-tratamento de secções de tecidos desparafinizados com recuperação do epítopo
induzida por calor (HIER). Obtêm-se resultados óptimos ao pré-tratar os tecidos com HIER utilizando Dako
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (Referências K8005/K8015) ou Dako Target Retrieval Solution
(Referências S1700/S1699).
É recomendado o pré-tratamento das secções desparafinizadas de tecido fixado em formol e impregnado em
parafina utilizando o Dako PT Link (Referência PT100/PT101). Para informações detalhadas, consultar o PT Link
User Guide. Para o PT Link, devem ser utilizados os seguintes parâmetros: Temperatura de pré-aquecimento:
65 °C; temperatura e tempo da recuperação do epítop o: 97 °C durante 20 (±1) minutos; arrefecer até 65 °C. Retirar
o suporte de lâminas do tanque PT e mergulhar, imediatamente, as lâminas num frasco/tanque (por exemplo, PT
Link Rinse Station, Referência PT109) contendo EnVision™ FLEX Wash Buffer (10X) (Referência K8002/8012),
diluído e à temperatura ambiente. Deixar as lâminas em Wash Buffer durante 1–5 minutos.
As secções de tecido não devem secar em nenhum momento durante o pré-tratamento ou durante o processo de
coloração imuno-histoquímica. Para uma maior aderência das secções de tecido às lâminas de vidro, recomenda-se
a utilização de Dako Silanized Slides (Referência S3003).
Secções congeladas e esfregaços celulares:
O anticorpo está recomendado para utilização em secções congeladas, fixadas em acetona, ou esfregaços de
células fixadas.
Procedimento de
coloração incluindo
materiais necessários,
mas não fornecidos
Diluição: Monoclonal Mouse Anti-Human B-Cell-Specific Activator Protein, Referência M7307, pode ser utilizado
numa proporção de diluição de 1:15–1:30 quando aplicado em secções pré-tratadas, fixadas em formol e
impregnadas em parafina, utilizando 20 minutos de incubação à temperatura ambiente. Recomenda-se que o
anticorpo seja diluído em EnVision™ FLEX Antibody Diluent (Referências K8006/K8016), ou Dako Antibody Diluent
(Referência S0809) ou Dako Real™ Antibody Diluent (Referência S2022). Estas indicações servem apenas de
orientação. As condições ideais poderão variar dependendo das amostras e do método de preparação, devendo ser
determinadas individualmente por cada laboratório. O reagente de controlo negativo recomendado é Dako Negative
Control, Mouse IgG1 (Referência X0931), diluído à mesma concentração da IgG1 como anticorpo primário. A não
ser que a estabilidade do anticorpo diluído e do controlo negativo tenha sido estabelecida no procedimento de
coloração efectivo, recomenda-se a diluição destes reagentes imediatamente antes da utilização. Os controlos
positivos e negativos devem processar-se simultaneamente com as amostras do doente.
Os controlos tecidulares positivos e negativos devem processar-se simultaneamente com o mesmo protocolo das
amostras do doente. O tecido de controlo positivo deve incluir a amígdala e as células/estruturas devem apresentar
padrões de reacção conforme os descritos para este tecido nas “Características de desempenho” em todas as
amostras positivas.
Visualização: EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Referência K8002/K8012), substituindo a solução deste kit pela
solução EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (10x), (Referência K8005/K8015) utilizando uma
incubação de 20 minutos à temperatura ambiente. Seguir o procedimento fornecido no(s) sistema(s) de visualização
seleccionado(s).
Automação: o anticorpo é adequado para a coloração imuno-histoquímica utilizando plataformas automatizadas, tais
como Dako Autostainer, Autostainer Plus e Autostainer Link.
Interpretação
da coloração
As células marcadas pelo anticorpo apresentam uma coloração nuclear.
Características
de desempenho
Tecidos normais: Tecidos linfóides normais (gânglio linfático, baço e amígdala) apresentam uma forte coloração
BSAP nuclear em linfócitos B de centro folicular e em linfócitos B da zona do manto, mas os linfócitos da zona T,
plasmócitos, células endoteliais e macrófagos são negativos. Observa-se uma coloração fraca na lâmina própria do
cólon. Observa-se uma coloração de fundo na cápsula de Bowman do rim.
Tecidos anormais: O anticorpo marcou 97/158 linfomas de Hodgkin clássicos, 127/127 linfomas B grandes difusos,
41/41 linfomas foliculares, 66/66 linfomas de células do manto, 11/11 linfomas da zona marginal, 5/5 linfomas de
Burkitt atípicos, 30/30 linfomas de Burkitt, 76/76 leucemias linfocíticas crónicas/linfomas linfocíticos pequenos, 22/22
linfomas B grandes mediastínicos, 6/6 linfomas/leucemias linfoblásticas B precursoras, 6/6 linfomas B grandes ricos
em linfócitos T, 6/6 leucemias de células cabeludas, 4/16 carcinomas neuroendócrinos, 12/12 linfomas da zona
marginal nodais, 6/6 linfomas de Hodgkin predominantes em linfócitos nodulares, 23/30 doenças linfoproliferativas
pós-transplante e 1/18 casos de linfomas de células grandes anaplásicos, 1/26 casos de cancro do rim, 1/16 casos
de cancro da bexiga, 7/21 casos de cancro da próstata, 1/14 casos de cancro do estômago, 4/81 casos de cancro
do cólon, 3/19 casos de cancro do colo do útero, 3/18 casos de cancro do útero e 4/13 casos de cancro do ovário.
Não se observou qualquer marcação em 6 leucemias mielóides agudas, 45 linfomas T angioimunoblásticos,
27 linfomas de células grandes anaplásicas ALK+, 6 leucemias mielógenas crónicas, 1 linfoma T/NK extranodal de
tipo nasal, 1 linfoma T hepato-esplénico, 5 casos de micose fungóide, 157 linfomas T periféricos não especificados
(PTCL/U), 6 mielomas de plasmócitos, 1 PTCL/U pós-transplante, 6 linfomas/leucemias linfoblásticos T precursores,
1 linfoma T semelhante a paniculite subcutânea, 22 casos de cancro do pâncreas, 27 casos de cancro hepático,
46 sarcomas, 13 melanomas, 10 timomas, 10 meduloblastomas, 10 astrocitomas I/II, 10 glioblastomas, 100 casos
de cancro do pulmão e 21 casos de cancro do testículo.
(119106-001)
Dako Denmark A/S
M7309/PT/THO/12.06.08 p. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Referências
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the pan-B-cell markers CD20, CD22 and CD79a are useful in the differential diagnosis of classic Hodgkin
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Pax-5 immunoexpression in various types of benign and malignant tumours: a high-throughput tissue
microarray analysis. J Clin Pathol 2007:60:709-14.
8.
Feldman AL, Dogan A. Diagnostic uses of Pax5 immunohistochemistry [review]. Adv Anat Pathol 2007:14:323-34.
Explicação dos símbolos
Número de catálogo
Limite da temperatura
Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
Código do lote
Consultar as instruções
de utilização
Utilizar até
(119106-001)
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Fabricante
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