Dako Autostainer/Autostainer Plus

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Alpha-1-Antitrypsin
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Referência IS505
Finalidade
Para utilização em diagnóstico in vitro.
O FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Alpha-1-Antiptrypsin, Ready-to-Use, (Dako Autostainer/Autostainer Plus),
é indicado para utilização em imuno-histoquímica em conjunto com instrumentos Dako Autostainer/Autostainer Plus.
Este anticorpo é útil para a identificação da alfa-1-antitripsina, por exemplo, nos hepatócitos na deficiência de
alfa-1-antitripsina (1). A interpretação clínica de qualquer coloração ou da sua ausência deve ser complementada
com estudos morfológicos utilizando controlos adequados e deve ser avaliada dentro do contexto do historial clínico
do doente e através de outros testes de diagnóstico por um patologista qualificado.
Resumo
e explicação
A alfa-1-antitripsina (AAT) é uma glicoproteína com um peso de 51 kDa sintetizada especialmente no fígado. É uma
proteína de fase aguda e funciona como inibidor principal das proteases de serina, como a elastase de neutrófilos,
colagenase e quimotripsina. Os indivíduos com baixo nível geneticamente determinado de AAT no soro estão em risco
de desenvolver enfisema pulmonar, doença crónica do fígado e carcinoma hepatocelular. A forma clássica da deficiência
de AAT está associada à retenção de AAT polimérica no retículo endoplasmático das células do fígado (2, 3).
A AAT está presente nas células do fígado normais, nos histiócitos e monócitos e numa grande variedade de tumores
de diferenciação epitelial e mesenquimal (2).
Consultar as Instruções Gerais para Coloração Imuno-histoquímica da Dako ou as instruções do sistema de detecção
quanto aos procedimentos de IHC para obter informação sobre: 1) Princípio do procedimento, 2) Materiais necessários,
mas não fornecidos, 3) Conservação, 4) Preparação das amostras, 5) Procedimento de coloração, 6) Controlo de
qualidade, 7) Resolução de problemas, 8) Interpretação da coloração, 9) Limitações gerais.
Reagente fornecido
Anticorpo policlonal de coelho pronto a utilizar, fornecido na forma líquida num tampão com proteína estabilizadora
e 0,015 mol/L de NaN3.
Imunogénio
Alfa-1-anti-tripsina isolada a partir de plasma humano.
Especificidade
O anticorpo reage com a alfa-1-antitripsina humana. Os vestígios de anticorpos contaminantes foram removidos
através de absorção por fase sólida com proteínas de plasma humano.
Imunoelectroforese cruzada: Apenas aparece o arco de precipitação alfa-1-antitripsina quando se utiliza a Referência
A0012 Dako a 12,5 µL por cm2 de área de gel contra 2 µL de plasma humano. Coloração: Coomassie Brilliant Blue.
Precauções
1. Para utilizadores profissionais.
2. Este produto contém azida de sódio (NaN3), um produto químico altamente tóxico na forma pura. Em situações
de concentração do produto, embora não sendo classificada como perigosa, a azida de sódio pode reagir com
as canalizações de chumbo e de cobre, formando acumulações de azidas metálicas altamente explosivas.
Ao eliminar o produto, adicionar água abundante para evitar a acumulação de azidas metálicas na canalização.
3. Tal como acontece com qualquer produto de origem biológica, deverão utilizar-se procedimentos
de manuseamento adequados.
4. Usar equipamento de protecção pessoal adequado para evitar o contacto com a pele e os olhos.
5. A solução não utilizada deverá ser eliminada em conformidade com as regulamentações locais e nacionais.
Conservação
Conservar entre 2–8°C. Não utilizar após o fim do p razo de validade impresso no frasco. Se os reagentes forem
conservados em condições diferentes das especificadas, o utilizador deverá verificar essas mesmas condições.
Não existem sinais óbvios que indiquem a instabilidade deste produto. Por isso, devem processar-se controlos
positivos e negativos simultaneamente com as amostras do doente. Caso se observe uma coloração inesperada
que não possa ser explicada pela variação nos procedimentos laboratoriais e se suspeite da existência de um
problema com o anticorpo, contactar a Assistência Técnica da Dako.
Preparação das
amostras
incluindo materiais
necessários, mas não
fornecidos
O anticorpo pode ser utilizado para marcar secções de tecido fixadas em formol e impregnadas em parafina. As
amostras de tecidos devem ser cortadas em secções de aproximadamente 4 µm.
É necessário proceder ao pré-tratamento com recuperação do epítopo induzida por calor (HIER) utilizando Dako PT
Link (Referência PT100/PT101). Para informações detalhadas, consultar o Guia do Utilizador PT Link. Obtêm-se
resultados óptimos ao pré-tratar os tecidos com FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Referência
K8010/K8004).
Secções impregnadas em parafina: É recomendado o pré-tratamento das secções de tecido fixado em formol e
impregnado em parafina utilizando o procedimento de preparação de amostras 3 em 1 para o Dako PT Link. Seguir
os procedimentos de pré-tratamento delineados no folheto informativo do EnVision FLEX Target Retrieval
Solution, High pH (50x) (Referência K8010/K8004). Nota: Após a coloração, as secções têm de ser desidratadas,
limpas e montadas com um meio de montagem permanente.
Secções desparafinizadas: É recomendado o pré-tratamento das secções desparafinizadas de tecido fixado em
formol e impregnado em parafina utilizando o Dako PT Link e seguindo o mesmo procedimento tal como descrito
(116625-002)
Dako Denmark A/S
IS505/PT/MNI/2009.12.04 p. 1/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
para as secções impregnadas em parafina. Após a coloração, as lâminas devem ser montadas utilizando um meio
de montagem aquoso ou permanente.
As secções de tecido não devem secar durante o tratamento ou durante o processo de coloração imunohistoquímica seguinte. Para uma maior aderência das secções de tecido às lâminas de vidro, recomenda-se a
utilização de FLEX IHC Microscope Slides (Referência K8020).
Procedimento de
coloração
incluindo materiais
necessários, mas não
fornecidos
O sistema de visualização recomendado é o EnVision FLEX, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(Referência K8010). As etapas de coloração e os tempos de incubação são pré-programados no software dos
instrumentos Dako Autostainer/Autostainer Plus, utilizando os seguintes protocolos:
Modelo de protocolo: FLEXRTU2 (200 µL de volume de dispensa) ou FLEXRTU3 (300 µL de volume de dispensa)
Autoprogram: AAT (sem contrastação) ou AATH (com contrastação)
Em processos de coloração com <10 lâminas, a etapa auxiliar deve ser definida para "tampão de lavagem". Para
processos de coloração com > de 10 lâminas, a etapa auxiliar deve ser definida para "nenhuma". Isto assegura
tempos de lavagem comparáveis.
Todas as etapas de incubação devem ser realizadas à temperatura ambiente. Para mais detalhes, consultar o
Manual do Operador para o respectivo instrumento. Se os protocolos não estiverem disponíveis no instrumento
Dako Autostainer utilizado, contactar o Serviço Técnico da Dako.
As condições ideais poderão variar dependendo das amostras e dos métodos de preparação, devendo
ser determinadas por cada laboratório. Se o patologista que procede à avaliação pretender uma intensidade
de coloração diferente, pode ser contactado um Especialista de Aplicações/Especialista do Serviço Técnico
da Dako, para se obterem informações acerca da re-programação do protocolo. Certificar-se de que o desempenho
do protocolo ajustado ainda é válido, avaliando se o padrão de coloração é idêntico ao padrão de coloração descrito
nas "Características de desempenho".
Recomenda-se a contrastação em hematoxilina com o EnVision FLEX Hematoxylin (Dako Autostainer/Autostainer
Plus) (Referência K8018). É recomendado um meio de montagem não aquoso e permanente.
Os controlos positivos e negativos devem processar-se simultaneamente com o mesmo protocolo das amostras
do doente. Os tecidos de controlo positivo devem incluir as amígdalas e fígado e as células/estruturas devem
apresentar padrões de reacção conforme os descritos para estes tecidos nas "Características de desempenho"
em todas as amostras positivas. O reagente de controlo negativo recomendado é o FLEX Negative Control, Rabbit
(Dako Autostainer/Autostainer Plus) (Referência IS600).
Interpretação da
coloração
O padrão de coloração celular é citoplásmico.
Características de
desempenho
Tecidos normais: O anticorpo marca células de fígado normais (1) e os leucócitos polimorfonucleares, os monócitos
e os seus precursores. Os linfócitos, as células E-roseta, os linfócitos activados por concanavalina A, as células
"natural killer", os glóbulos vermelhos, os eritroblastos e os megacariócitos são negativos (4).
Tecidos anormais: Em 13 doentes com doenças do fígado diferentes, o anticorpo marcou as células do fígado com
e sem glóbulos de AAT. Nas amostras com glóbulos, foi possível utilizar-se uma diluição muito maior do anticorpo,
indicando uma maior concentração de AAT nestas amostras (1).
Referências
1. Clausen PP. Immunohistochemical demonstration of alpha-1-antitrypsin in liver tissue. A methodological
investigation. Acta path microbiol scand Sect A 1980;88:299–306.
2. Leong ASY, Cooper K, Leong FJWM. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford
University Press;1999.p. 7–8.
3. Perlmutter DH. Liver injury in α1-antitrypsin deficiency: an aggregated protein induces mitochondrial injury. J Clin
Invest 2002;110:1579–83.
4. Hau J, Nilsson M, Skovgaard-Jensen H-J, de Souza A, Eriksen E, Wandall LT. Analysis of animal serum proteins
using antisera against human analogous proteins. Scand J Lab Anim Sci 1990;17:3–7.
Explicação dos símbolos
Número de catálogo
Limites de temperatura
Utilizar até
Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
Conteúdo suficiente para <n>
testes
Fabricante
Consultar as instruções de
utilização
Código de lote
(116625-002)
Dako Denmark A/S
IS505/PT/MNI/2009.12.04 p. 2/2
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