Referência IR508

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Chorionic Gonadotropin
Ready-to-Use
(Link)
Referência IR508
Finalidade
Para utilização em diagnóstico in vitro.
O FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Chorionic Gonadotropin, Ready-to-Use, (Link), é indicado para utilização em
imuno-histoquímica em conjunto com instrumentos Autostainer Link. Este anticorpo é útil para a identificação das
células que contêm hCG (1) e pode ser utilizado para a demonstração dos elementos trofoblásticos, por exemplo,
nos tumores das células germinais (2). A interpretação clínica de qualquer coloração ou da sua ausência deve ser
complementada com estudos morfológicos utilizando controlos adequados e deve ser avaliada dentro do contexto
do historial clínico do doente e através de outros testes de diagnóstico por um patologista qualificado.
Resumo
e explicação
A gonadotropina coriónica humana (hCG) é uma glicoproteína de 40 kD composta por duas subunidades
designadas de α e β. A subunidade α é comum à hCG, à hormona luteinizante (LH), à hormona foliculoestimulante
(FSH) e à hormona estimulante da tiróide (TSH), ao passo que a subunidade β é única para a hCG apesar de a sua
sequência de aminoácidos ser parcialmente idêntica à da subunidade β da LH (3, 4). A hCG é o marcador mais
importante das células trofoblásticas gestacionais, estando presente nas células sinciciotrofoblásticas e nas células
do trofoblasto intermédio, mas ausente nos citotrofoblastos. A expressão da hCG também foi demonstrada em
alguns tumores não trofoblásticos, por exemplo, em 14% dos doentes com carcinoma hepatocelular (4). Na
gravidez, a concentração de hCG no soro aumenta inicialmente a uma velocidade exponencial tendo, depois, o seu
pico por volta de 100 kIU/L, aproximadamente na décima semana após a concepção. A concentração diminui cerca
de dez vezes durante as várias semanas seguintes seguida de um pequeno aumento perto do final do tempo (5).
Consultar as Instruções Gerais para Coloração Imuno-histoquímica da Dako ou as instruções do sistema de
detecção quanto aos procedimentos de IHC para obter informação sobre: 1) Princípio do procedimento, 2) Materiais
necessários, mas não fornecidos, 3) Conservação, 4) Preparação das amostras, 5) Procedimento de coloração,
6) Controlo de qualidade, 7) Resolução de problemas, 8) Interpretação da coloração, 9) Limitações gerais.
Reagente fornecido
Anticorpo policlonal de coelho pronto a utilizar, fornecido na forma líquida num tampão com proteína estabilizadora
e 0,015 mol/L de NaN3.
Imunogénio
A cadeia beta isolada da hCG.
Especificidade
O anticorpo reage com a hCG e, à semelhança do que acontece com grande parte dos outros anticorpos policlonais
para beta-hCG, apresenta ainda uma ligeira reacção cruzada (cerca de 4%) com a LH (3). Os vestígios de
anticorpos contaminantes das proteínas do plasma humano foram removidos através de absorção por fase sólida.
Na imunoelectroforese cruzada, apenas o arco da precipitação de hCG aparece quando de utiliza 12,5 µL de
Referência Dako A0231 por cm2 de área de gel contra 10 µL de urina concentrada de mulheres grávidas (entre
a 15º e a 16º semana de gestação). Não se observa precipitação quando são testados 12,5 µL do anticorpo
concentrado por cm2 de área de gel contra 10 µL de plasma humano normal. Coloração: Coomassie Brilliant Blue.
Precauções
1. Para utilizadores profissionais.
2. Este produto contém azida de sódio (NaN3), um produto químico altamente tóxico na forma pura. Em situações
de concentração do produto, embora não sendo classificada como perigosa, a azida de sódio pode reagir com as
canalizações de chumbo e de cobre, formando acumulações de azidas metálicas altamente explosivas. Ao
eliminar o produto, adicionar água abundante para evitar a acumulação de azidas metálicas na canalização.
3. Tal como acontece com qualquer produto de origem biológica, deverão utilizar-se procedimentos de
manuseamento adequados.
4. Usar equipamento de protecção pessoal adequado para evitar o contacto com a pele e os olhos.
5. A solução não utilizada deverá ser eliminada em conformidade com as regulamentações locais e nacionais.
Conservação
Conservar entre 2–8 ºC. Não utilizar após o fim do prazo de validade impresso no frasco. Se os reagentes forem
conservados em condições diferentes das especificadas, o utilizador deverá verificar essas mesmas condições. Não
existem sinais óbvios que indiquem a instabilidade deste produto. Por isso, devem processar-se controlos positivos
e negativos simultaneamente com as amostras do doente. Caso se observe uma coloração inesperada que não
possa ser explicada pela variação nos procedimentos laboratoriais e se suspeite da existência de um problema com
o anticorpo, contactar a Assistência Técnica da Dako.
Preparação
das amostras
incluindo materiais
necessários, mas
não fornecidos
O anticorpo pode ser utilizado para marcar secções de tecido fixadas em formol e impregnadas em parafina. As
amostras de tecidos devem ser cortadas em secções de aproximadamente 4 µm.
É necessário proceder ao pré-tratamento com recuperação do epítopo induzida por calor (HIER) utilizando Dako PT
Link (Referência PT100/PT101). Para informações detalhadas, consultar o Guia do Utilizador PT Link. Obtêm-se
resultados óptimos ao pré-tratar os tecidos com EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(Referência K8000/K8004).
Secções impregnadas em parafina: É recomendado o pré-tratamento das secções de tecido fixado em formol e
impregnado em parafina utilizando o procedimento de preparação de amostras 3 em 1 para o Dako PT Link. Seguir
(115707-002)
Dako Denmark A/S
IR508/PT/MNI/2009.12.04 p. 1/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
os procedimentos de pré-tratamento delineados no folheto informativo do EnVision FLEX Target Retrieval
Solution, High pH (50x) (Referência K8000/K8004). Nota: Após a coloração, as secções têm de ser desidratadas,
limpas e montadas com um meio de montagem permanente.
Secções desparafinizadas: É recomendado o pré-tratamento das secções desparafinizadas de tecido fixado em
formol e impregnado em parafina utilizando o Dako PT Link e seguindo o mesmo procedimento tal como descrito
para as secções impregnadas em parafina. Após a coloração, as lâminas devem ser montadas utilizando um meio
de montagem aquoso ou permanente.
As secções de tecido não devem secar durante o tratamento ou durante o processo de coloração imunohistoquímica seguinte. Para uma maior aderência das secções de tecido às lâminas de vidro, recomenda-se a
utilização de FLEX IHC Microscope Slides (Referência K8020).
Procedimento
de coloração
incluindo materiais
necessários, mas
não fornecidos
O sistema de visualização recomendado é o EnVision FLEX, High pH, (Link) (Referência K8000). As etapas de
coloração e os tempos de incubação são pré-programados no software Autostainer Link. O volume recomendado de
aplicação de reagente é 1 x 200 µL ou 2 x 150 µL por lâmina. Consultar o Guia do Utilizador do Autostainer Link
para obter instruções detalhadas sobre a colocação das lâminas e dos reagentes. Se os protocolos não estiverem
disponíveis na plataforma Autostainer utilizada, contactar o Serviço Técnico da Dako. Todas as etapas de
incubação devem ser realizadas à temperatura ambiente.
As condições ideais poderão variar dependendo das amostras e dos métodos de preparação, devendo ser
determinadas por cada laboratório. Se o patologista que procede à avaliação pretender uma intensidade de
coloração diferente, é possível ajustar os tempos de incubação e a escolha do sistema de visualização do
EnVision FLEX/EnVision FLEX+. Pode ser contactado um Especialista de Aplicações/Especialista do Serviço
Técnico da Dako, para se obterem informações acerca da re-programação do protocolo. Certificar-se de que o
desempenho do protocolo ajustado ainda é válido, avaliando se o padrão de coloração é idêntico ao padrão de
coloração descrito nas "Características de desempenho".
Recomenda-se a contrastação em hematoxilina com o EnVision FLEX Hematoxylin (Referência K8008).
É recomendado um meio de montagem não aquoso e permanente.
Os controlos positivos e negativos devem processar-se simultaneamente com o mesmo protocolo das amostras do
doente. O tecido de controlo positivo deve incluir placenta e as células/estruturas devem apresentar padrões de
reacção conforme os descritos para este tecido nas "Características de desempenho" em todas as amostras
positivas. O reagente de controlo negativo recomendado é o FLEX Negative Control, Rabbit (Link)
(Referência IR600).
Interpretação da
coloração
O padrão de coloração celular é citoplásmico.
Características de
desempenho
Tecidos normais: Na placenta do primeiro trimestre, o anticorpo marca sobejamente os grânulos citoplásmicos dos
sinciciotrofoblastos, alguns em processo de exocitose (1).
Tecidos anormais: Foram estudadas 189 amostras de orquidectomia com tumores de células germinais
(95 seminomas puros e 94 não seminomas) com o anticorpo. A presença de hCG foi demonstrada em todos os
componentes de coriocarcinoma nos sinciciotrofoblastos e células tipo sinciciotrofoblastos em 8% dos seminomas e
30% dos não seminomas. O carcinoma in situ presente nos túbulos seminíferos adjacentes aos tumores foi positivo
à hCG em alguns casos (2).
Referências
1. Morrish DW, Marusyk H, Siy O. Demonstration of specific secretory granules for human chorionic gonadotropin in
placenta. J Histochem Cytochem 1987;35:93-101.
2 Jacobsen GK, Jacobsen M. Alpha-fetoprotein (AFP) and human chorionic gonadotropin (HCG) in testicular germ
cell tumors. A prospective immunohistochemical study. Acta Path Microbiol Immunol Scand Sect A
1983;91:165-76.
3. Mehta HC, MacDonald DJ. A sensitive enzyme immunoassay specific for human chorionic gonadotrophin. Clin
Chim Acta 1982;121:245-50.
4. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology; London: Oxford
University Press; 1999. p. 25-6.
5. The National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Choriogonadotropin testing: Nomenclature,
reference preparations, assay performance, and clinical application; Approved guideline. NCCLS document
I/LA10-A (1-56238-314-0) NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA;
1996.
Explicação dos símbolos
Número de catálogo
Limite da temperatura
Utilizar até
Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
Conteúdo suficiente para <n>
testes
Fabricante
Consultar as instruções de
utilização
Código do lote
(115707-002)
Dako Denmark A/S
IR508/PT/MNI/2009.12.04 p. 2/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17