PPG504 Técnicas de Transformação Genética de Plantas

UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVR AS
PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO
COORDENADORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO STRICTOSENSU
DISCIPLINA
Código
Denominação
PPG 504
Técnicas de Transformação Genética de Plantas
Carga Horária
Crédito(s)
(*)
Teórica Prática
Total
03
30
DEPARTAMENTO
PROFESSOR(ES)
Biotecnologia Vegetal
Luciano Vilela Paiva
15
45
EMENTA: (Síntese do Conteúdo)
Introdução à transformação genética de plantas; Biologia da transformação; Transfêrencia via
Agrobacterium; Vetores de clonagem; T-DNA; Transformação Protoplastos; Biobalística; Co-cultura
com linhagens desarmadas de Agrobacterium.
ASSINATURA(S):
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Aprovado na Assembléia Departamental em _____/_____/_____
Lavras, ___/___/___
(*)15 horas/aulas teóricas = 1 crédito
15 horas/aulas práticas = 1 crédito
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Chefe do Departamento
Conteúdo Programático
1. Introdução
2.
2.1. Apresentação dos professores
2.2. Apresentação do plano de curso
2.3. Metodologia do ensino-aprendizagem e avaliação
2.4. A disciplina no currículo e integração com outras disciplinas
2.5. A disciplina na formação do profissional
3. Introdução à transformação genética de plantas
3.1. Atualização às técnicas modernas de clonagem
3.2. Ferramentas para expressão de genes em plantas
4. Biologia da transformação
4.1. Métodos indiretos
4.2. Métodos diretos
5. Transferência via Agrobacterium
5.1.
5.2.
5.3.
5.4.
5.5.
5.6.
Introdução
A biologia de Agrobacterium tumefasciens e Agrobacterium rhizogenes
Biologia de infecção da Agrobacterium tumefasciens
Transformação de Arabidopsis thaliana via “floral dip”
Transferência de vetores de clonagem
A interação do plasmídeo Ti com o genoma da planta
6. Vetores de clonagem
6.1.
6.2.
6.3.
6.4.
6.5.
Introdução
Conjugação triparental
Eletroporação
Choque térmico
Extração de DNA total e plasmidial de Agrobacterium
7. T-DNA
7.1. Estrutura do T-DNA
7.2. Inserção do T-DNA na planta
7.3. Gene “Knockouts” e superexpressão
7.4. Ativação gênica via T-DNA e transposon
8. Transformação Protoplastos
8.1. Introdução
8.2. Isolamento de protoplastos
8.3. Análise de expressão
8.4. Cultura e regeneração dos protoplastos
9. Biobalística
9.1.
9.2.
9.3.
9.4.
9.5.
Introdução
Preparação do material
Vetores para transformação
Bombardeamento
Desenvolvimento de plantas
10. Co-cultura com linhagens desarmadas de Agrobacterium
10.1.
Transformação via discos foliares
10.2.
Cultivo “in vitro”
11. Identificação de plantas transgências
11.1. Análises de integração do DNA
11.2. Sourthern Blot
11.3. PCR
11.4. Elementos de seleção (GUS, GFP, NPTII)
11.5. Ensaio de Histoquímico de GUS
11.6. Fenotipagem
BIBLIOGRAFIA
Cultura de tecidos e transformação genética de plantas / editado por Antônio Carlos Torres; Linda Styer
Caldas; José Amauri Buso. - Brasília: Embrapa-SPI / Embrapa-CNPH, 1998. 2v. (864p.).
Clonagem gênica e análise de DNA: uma introdução / T. A. Brown; trad. Henrique Bunselmeyer Ferreira e
Luciane Maria Pereira Passaglia. - 4 ed. - Porto Alegre: Artmed, 2003.
Recombinant DNA / James D. Watson...[et al.] - 2nd ed. New York: Scientific American Books, 1998.
Genes VII / Benjamin Lewin; trad. Henrique Ferreira...[et al.] - Porto Alegre: Artmed Editora, 2001.
Biologia Molecular da Célula / Bruce Alberts, Denis Bray, Julian Lewis, Martin Raff, Keith Roberts, James
D. Watson: trad. Amauri Braga simonetti...[et al.] - 3 ed. - Porto Alegre: Artes Médicas, 1997.
Manual de Transformação Genética de Plantas / Ana Cristina Miranda Brasileiro, Vera Tavares de Campos
Carneiro – Brasília: Embrapa-SPI/Embrapa-Cenargem, 1998.