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Southern, Northern e Western
Blot
FISMA – FEA
Curso de Biotecnologia
Profa Cristina
Eletroforese
Eletroforese
• A eletroforese em gel é uma das principais ferramentas de
trabalho em Biologia Molecular.
• Em geral, DNA, RNA e proteínas podem ser separados
segundo o seu tamanho numa matriz usando um campo
elétrico aplicado.
• Na eletroforese em gel de agarose, o DNA ou o RNA é
separado fazendo a amostra migrar através de um gel de
agarose ou de poliacrilamida.
• As proteínas são normalmente separadas segundo o seu
tamanho usando eletroforese em gel de acrilamida; também
podem ser separadas segundo a sua carga eléctrica usando
focagem isoeléctrica.
A técnica de Southern Blot
• O Southern blot é uma técnica que permite obter informação sobre
a massa molecular e a quantidade relativa de uma determinada
sequência de DNA.
• A técnica, desenvolvida por Edwin Southern, é uma combinação de
eletroforese em gel do DNA (este é frequentemente fragmentado
por enzimas de restrição antes de fazer o Southern), transferência
deste para uma membrana e hibridização com uma sonda marcada
(radioativa ou fluorescente).
• Após a hibridização, a membrana é lavada para remover sonda não
ligada a DNA e obtém-se uma imagem através de autoradiografia
ou autofluorescência. A imagem obtida dá a(s) localização(ões) do
DNA que liga a sonda, com a intensidade do sinal dando uma
medida relativa da quantidade de DNA que hibridiza.
http://www.enciclopedia.com.pt/articles.php?article_id=1038
Northern blot
• O Northern blot estuda o perfil de expressão de RNA
mensageiro, onde, quando e quanto de determinado
RNA mensageiro (correspondente à expressão de um
determinado gene) está presente numa dada amostra.
• É uma das formas mais simples de determinar em que
altura certos genes estão a ser expressos em sistemas
vivos.
• Neste processo, o RNA é separado numa eletroforese
em gel, transferido para uma membrana e detectado
de forma similar ao DNA no Southern blot.
http://www.enciclopedia.com.pt/articles.php?article_id=1038
Western blot
• O Western blot usa o mesmo princípio do
Southern blot e do Northern blot mas é
aplicado a proteínas. Estas são separadas
usando eletroforese em gel de poliacrilamida,
na presença do detergente dodecil sulfato de
sódio (SDS).
http://www.enciclopedia.com.pt/articles.php?article_id=1038