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Eletroforese
Faculdade de Biomedicina
Disciplina de Instrumentação Laboratorial
Definição:
Separação de moléculas em um campo elétrico
de acordo com o tamanho, forma ou a carga
elétrica.
Tem aplicações nas áreas de análises clínicas,
moleculares e genéticas.
Aplicações da eletroforese
1 – detectar a presença de um gene no DNA de um indivíduo
2 – testes de paternidade
3 – diagnóstico de anemias (exemplo: anemia falciforme)
4 – diagnóstico de deficiências de anticorpos
(imunoglobulinas)
5 – controle da qualidade do DNA e RNA que serão
analisados
Etapas da eletroforese
• Extração e purificação do material;
• Aplicação do material em um suporte: gel de
agarose, acrilamida, acetato de celulose;
• Imersão deste suporte em uma solução tampão
que permita a transmissão da corrente elétrica;
• Aplicação da corrente elétrica em intensidade e
tempo adequados,
• Visualização dos resultados.
Cuba e fonte para eletroforese
Tipos de gel: Agarose
Usados para separar moléculas de DNA e RNA
de acordo com seu tamanho. Podem ser usadas
diferentes concentrações de agarose.
Normalmente utiliza-se a 2%
Eletroforese de DNA
Tipos de gel: Poliacrilamida
Usados para separar pedaços de DNA de
tamanhos muito pequenos e proteínas.
Acetato de celulose
Utilizado para separar diferentes tipos de
hemoglobinas de acordo com sua carga elétrica.
Esquema da eletroforese de hemoglobina
Corrente elétrica
As amostras de DNA, RNA e proteína
migram para o pólo positivo, pois são
carregadas negativamente.
Certifique-se da posição do gel e a direção
da eletroforese!
Tampão de corrida
• Para amostras de DNA e RNA o tampão
deve ser o mesmo utilizado para diluir a
agarose (TAE ou TBE).
• Para amostras de hemoglobina utiliza-se o
tampão Tris em pH 8,5 (alcalino) ou
tampão agarose pH 6,5 (ácido).
Análise dos resultados
A visualização das diferentes bandas depende de
coloração específica.
DNA e RNA = brometo de etídeo ou SYBR green
Proteínas = azul de coomassie e prata
DNA e RNA
• Marcadores de tamanho para DNA e RNA
DNA corado com SYBR green
Marcador de tamanho (100 pares de base)
Proteínas