Análise Molecular de OGMs
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Análise Molecular de OGMs Identificação Molecular Análise de DNA - PCR - Southern Blot - Real Time PCR - Arranjos Análise de Proteína Baseadas em imunologia - ELISA - Western blot - Proteoma Técnica usada para amplificar uma região específica de DNA em visando produzir quantidade de DNA suficiente para ser testado adequadamente Reação em Cadeia da Polimerase Polymerase chain reaction - PCR Reação de PCR Como funciona?? Vantagens: - Rapidez - Sensibilidade - Custo Desvantagens: - Falsos resultados EXTRAÇÃO DE DNA Qualidade do DNA PCR Termociclador Eletroforese Cubas horizontais Visualização em UV Amplificação de genes via PCR Positivo/Negativo Presença ou ausência de banda em gel de agarose Southern Blot Membrana de Nylon Papel para Absorção Gel Esponja Solução de transferência 1. Digestão do DNA com enzimas de restrição 2. Eletroforese DNA em Gel de Agarose 3. Transferência do DNA para a membrana de nylon (Blotting) Retirada da membrana com o DNA Retirada das hibridizações Hibridização da membrana com sonda radioativa 4. Hibridização da membrana com a sonda específica não específicas 5. Revelação do autoradiograma 23,130 bp 9,416 bp 6,557 bp 4,361 bp 2,322 bp 2,027 bp Plasm. 3C Plasm.1C Ct-P5-20 Ct-P5-16 Ct-P5-08 Ct-P5-07 Ct-cont Cr-P5-14 Cr-P5-03 Cr-P5-02 Cr-P5-01 Cr-cont Análise da integração do DNA ao genoma por Southern Blot Análise Molecular Southern blot PCR Digestão com EcoRI e hibridação com sonda específica para sarcotoxin IA Western blot Análise do fenótipo Sintoma aos 25 dias após inoculação (104 CFU/ml) Controle stx-5 Análise da Expressão de Genes Real Time PCR Resultados após amplificação Arranjos de DNA Aumento do número de genes chips de DNA diferentes seqüências para detectar genes expressos ou introduzidos em plantas Tecnologia de Arranjos Proteoma Levantamento quantitativo de proteínas/peptídeos em uma amostra para identificar mudanças de interesse Proteoma Genoma Proteínas e peptídeos DNA Dinâmico Estático Células e tecido específicos Orgão específico Separação e preparo de amostra Digestão - tripsina Peptídeo Separação
