INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA RIO GRANDE DO NORTE PROF.: MS. RAQUEL MAIA BIOLOGIA II DISCENTES: WESTERN BLOTTING ALMIR SILVA TEODORO JÚNIOR; JOAILSON MIRANDA DA SILVA JÚNIOR; JOÃO ROGER MACÊDO DA SILVA; LARA GABRIELLY CARVALHO ARAÚJO NARA LUANA DANTAS SALDANHA; SILLAS VINICIUS FÉLIX MEDEIROS; MACILÉIA DA SILVA DAVI; DE CURRAIS NOVOS/RN 2019 HISTÓRICO • Criação; • Termo “blot” • Em que consiste a técnica; • Resumida em 5 etapas; • Imunodetecção; EXTRAÇÃO E QUANTIFICAÇÃO • Realização dos experimentos de Western blotting; • O mais utilizado para quantificar as proteínas em uma solução é o ensaio de Bradford; • Baseia-se na mudança de cor do corante blue G-250; • Interações hidrofóbicas e iónicas; FRACIONAMENTO DAS PROTEÍNAS Dodecil Sulfato de Sódio Gel de Poliacrilamida para Eletroforese • Eletroforese → SDS-PAGE "técnica que envolve a migração de partículas em um determinado gel" (PAGAND, 1999); • Polimerização de monômeros; • Agente redutor → beta-mercaptoetanol; • Separação de todos os tipos de proteína; FRACIONAMENTO DAS PROTEÍNAS TRANFERÊNCIA DE PROTEÍNAS • MÉTODOS: Por difusão; Por capilaridade; Por vácuo; • MAIS USADO: Eletroblotting; • Em que consiste; • Fatores de eficiência; • Corante panceau S TRANFERÊNCIA DE PROTEÍNAS INCUBAÇÃO • FASES: 1º Anticorpo primário; 2º Proteína de interesse; 3º Anticorpo secundário; 4º Anti-IgG; • Modificação que permite a visualização da proteína de interesse; REVELAÇÃO PARA ANÁLISE DE DADOS • Conjugação do anticorpo com uma enzima; • Associação do anticorpo com um fluoróforo; Detecção por Quimioluminescência Detecção por fluorescência WESTERN BLOTTING • Uso; EETs; LVA; • Vantagens e desvantagens; • Técnica ELISA; COMO INTERPRETAR OS RESULTADOS COMO INTERPRETAR OS RESULTADOS COMO INTERPRETAR OS RESULTADOS • 1) A metodologia de “Western Blot" é considerada como teste confirmatório para a infecção pelo HIV de acordo com o Manual Técnico para Diagnóstico da Infecção pelo HIV (Ministério da Saúde). O resultado é considerado positivo pela presença de proteínas virais representadas por bandas reveladas no teste. Assinale a opção que indica um teste positivo. a) p 24. b) p24 e gp 120. c) gp 41 e p 66. d) p 17 e p 55. e) gp 60. COMO INTERPRETAR OS RESULTADOS
