Estabelecimento de um protocolo de extração de proteínas para

56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
303
Estabelecimento de um protocolo de extração de
proteínas para análise proteômica utilizando diferentes
tecidos de cana-de-açúcar
Barreto, KFM; Ferreira, ACF; Uchôa, AF; Scortecci, KC
Laboratório LBMG. Depto de Biologia Celular e Genética, DBG, UFRN.
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Palavras-chave: cana-de-açúcar, estresse oxidativo, extração de proteínas, proteômica
O gênero Saccharum apresenta grande importância economica, sendo o Brasil responsável por mais de 25% da
produção mundial. A região Norte-Nordeste é responsável apenas por 13% da produção devido às condições
edafo-climáticas como solo, regime de chuvas, temperatura. Estas condições promovem um estresse oxidativo
e consequentemente um florescimento precoce, que acarreta numa redução da produção em até 60%. Assim,
se faz necessário a aplicação do conhecimento proteômico de modo a prospectar proteínas que possam estar
associados a este processo. Este trabalho tem como objetivo geral prospectar proteínas associadas ao estresse
oxidativo por meio de geis bidimensionais. Neste trabalho o objetivo foi de padronizar as condições de extração
de modo a obter quantidade, qualidade e reprodutibilidade utilizando diferentes tecidos de cana-de-açúcar
( folha, ápice meristemático e raízes). É conhecido que existem variações de protocolos decorrentes ao tecido e
a planta utilizada devido à presença de pigmentos e metabólicos secundários que podem afetar a integridade, a
separação e a identificação dos peptídeos. Por isso, esta etapa de padronização é de extrema importância para a
proteômica. Os resultados obtidos em gel SDS-PAGE no primeiro protocolo utilizado (Tampão: Uréia 7M; Tiouréia
2M; DTT 25mM; glicerol 10% e triton X-100 1%) permitiram observar um padrão de extração eficiente apenas para
o apice meristemático, enquanto para os tecidos: folhas e raiz foi observado uma alta concentração de proteínas,
entretanto o padrão de migração foi de arrasto, provavelmente decorrente a algum metabólico presente. O
segundo protocolo testado com os três tecidos utilizou o tampão: Fenol 0,1M; Tris-HCl pH8.8; EDTA 10mM e 0,4%
2-mercaptoetanol. Neste protocolo foi observado um padrão de migração uniforme para os tecidos meristema
apical e folha, sendo observado algumas bandas em torno de 37-51 kDa. Entretanto, no tecido raiz foi observada
um rastro muito fraco. É importante ressaltar que os tecidos alvos para análise proteômica para prospecção de
proteínas associadas ao estresse oxidativo são folhas e raiz. Devido a isto, foi realizado um terceiro protocolo
onde o tampão de extração foi: PMSF 1mM; Tris-Hcl 40 mM pH 7,5; sacarose 250mM; EDTA 10mM; DTT 3mg;
triton X-100 1% e 2-mercaptoetanol 2%. O material foi separado em gel SDS-PAGE. Este gel mostrou um padrão
de migração uniforme para todos os três tecidos, com bandas variando desde 19 kDa até 202 kDa. Este protocolo
foi reproduzido mais uma vez obtendo-se o mesmo padrão. O material foi quantificado, e comparando-se o
tecido de raiz foi verificado que a concentração de proteínas obtidas foi três vezes maior que o segundo protocolo
utilizado. Além disto, a amostra obtida apresentou um menor índice de degradação e impurezas. Este método para
cana-de-açúcar se mostrou eficiente e reprodutivo para as análises proteômicas futuras em gel bidimensionais.
Auxílio Financeiro: CNPq