avaliação in vitro do índice mitótico e da atividade

Trabalho Submetido para Avaliação - 30/08/2012 18:15:11
AVALIAÇÃO IN VITRO DO ÍNDICE MITÓTICO E DA ATIVIDADE GENOTÓXICA
DO MELOXICAM LIVRE E NANOENCAPSULADO EM CULTURA DE LINFÓCITOS
HUMANOS
ALTEVIR ROSSATO VIANA ([email protected]) / BIOMEDICINA / UNIFRA, SANTA
MARIA - RS
MAGTON DA SILVEIRA ESTIVALES ([email protected]) / BIOMEDICINA / UNIFRA, SANTA
MARIA - RS
KÁTIA NASCIMENTO ([email protected]) / MESTRADO EM NANOCIÊNCIAS / UNIFRA,
SANTA MARIA - RS
THAYS HENNIG SILVA ([email protected]) / FARMÁCIA / UNIFRA, SANTA MARIA - RS
MICHELE RORATO SAGRILLO ([email protected]) / CURSO DE BIOMEDICINA / UNIFRA,
SANTA MARIA - RS
MARTA PALMA ALVES ([email protected]) / MESTRADO EM NANOCIÊNCIAS / UNIFRA,
SANTA MARIA - RS
ORIENTADOR: CRISTIANE LUCHESE ([email protected]) / MESTRADO EM
NANOCIÊNCIAS / UNIFRA , SANTA MARIA - RS
Palavras-Chave:
NANOCÁPSULAS, MELOXICAM, ÍNDICE MITÓTICO, LINFÓCITOS.
O meloxicam exerce o seu efeito através da inibição seletiva da enzima COX-2, evitando assim a síntese de
prostaglandinas, que pode conduzir a dor, febre e inflamação (KREUDER, et al 2012). Seu encapsulamento
seria uma boa alternativa para que não ocorra perda do princípio ativo até o sítio alvo, melhorando assim seu
efeito. Entretanto, cabe ressaltar que o mesmo é um xenobiótico ao organismo humano (LAPA, et al 2004) e
por isso é necessário fazer análises do efeito genotóxico para o uso seguro e terapêutico. Deste modo, as
células foram cultivadas e receberam um tratamento com diferentes concentrações (0,1; 1 e 5µM) de
meloxicam na forma livre, nanoencapsulado, ou de nanocápsulas sem o fármaco. Amostras de sangue
periférico foram obtidas de um voluntário do sexo masculino saudável, com idade de 22 anos, que não fuma,
bebe ou use medicação crônica, e foi coletado após 12 horas de jejum por punção venosa usando
Vacutainer superior® (BD Diagnostics, Plymouth, Reino Unido). O sangue coletado foi colocado em tubos
heparinizados e posteriormente, foram colocados em meio de cultura contendo 1 ml de RPMI 1640 com 10%
de soro fetal bovino (FCS) e 1% de penicilina/estreptomicina e fitoemaglutinina. As células foram mantidas
em cultura a 37°C numa atmosfera humidificada de CO2 a 5% durante 72 horas. Foram utilizados como
controle positivo para dano de DNA o peróxido de hidrogênio e como controle negativo somente células e
meio de cultura. Após 72 horas de cultura, as mitoses foram interrompidas na fase de metáfase com
colchicina. As amostras foram preparadas seguindo protocolo de Yunis (2006), para posterior análise ao
microscópio.No controle negativo foram obtidas 300 metáfases e no controle positivo, 20 com quebras
cromossômicas, além de núcleos com cariólise e cariorrexe. Na menor das concentrações houve a presença
de metáfases íntegras, mas com diminuição drástica na livre, sendo 5 vezes menor. Na concentração
intermediária de 1,0uM foram verificadas quebras cromossômicas somente no meloxicam nanoencapsulado,
nos outros observou-se apenas uma redução mitótica. Já na maior concentração não foram obtidas
metáfases, apenas 5 no meloxicam livre. Até o presente momento os resultados são inconclusivos devido ao
pequeno número de amostras analisadas. O meloxicam na forma livre, nanoencapsulado, ou de
nanocápsulas sem o fármaco, demonstraram diminuição do índice mitótico com o aumento da concentração,
tendo uma relação de equivalência entre os níveis de dano com a quantidade do fármaco adicionado a
cultura.
REFERÊNCIAS:
KREUDER, Amanda j; et al.; Bioavailability and pharmacokinetics of oral meloxicam in llamas; BMC
Veterinary Research; 8; 8 - 85; 2012.
LAPA, A. J. et al; Farmacologia e toxicologia de produtos naturais; farmacognosia: da planta ao
medicamento; 5; 247 - 262; 2004.
YUNIS, J.J.; High resolution of human chromosomes; Science; 4233; 1268 - 1270; 2006.