Aula 6 Técnicas de visualização de microrganismos

Curso Técnico em Química
Disciplina: Microbiologia
Técnicas de
Visualização de microrganismos
Microscopia e técnicas de
visualização de microrganismos
PREPARAÇÕES PARA A MICROSCOPIA E TÉCNICAS DE
VISUALIÇÃO DE MICRORGANISMOS:
A perfeita visualização dos microrganismos e/ou das suas
estruturas só é possível se, além da escolha do tipo mais eficiente
de microscopia, a preparação estiver adequada.
A escolha do tipo de preparação depende da informação desejada e
do microrganismo a ser avaliado.
Microscopia e técnicas de
visualização de microrganismos
TÉCNICA A FRESCO:
 células, pequenos organismos vivos ou fragmentos de tecidos
vivos  meio líquido o mais próximo possível do meio natural
Conservadores fisiológicos
Naturais
água doce, água do mar,
humor aquoso, soro
sanguíneo, líquido
amniótico
Artificiais
soro fisiológico, líquido de
Ringer, líquido de Knop
Microscopia e técnicas de
visualização de microrganismos
TÉCNICA A FRESCO:
 Vantagem:
 não produz modificações na forma e função
 serve de contraprova para outros métodos
 rapidez
 Restrições:
 objetos finos e transparentes
 não permite observações prolongadas
 mostra parte dos detalhes das estruturas
 Modo de preparo
 lâmina com lamínula
 gota pendente
Microscopia e técnicas de
visualização de microrganismos
TÉCNICA A FRESCO:
Microscopia e técnicas de
visualização de microrganismos
TÉCNICAS FIXADAS E CORADAS:
 Morfologia de células mortas
Etapas:
Esfregaço
Fixação
Coloração
Simples ou diferencial
Microscopia e técnicas de
visualização de microrganismos
TÉCNICAS FIXADAS E CORADAS:
 Coloração simples
Microscopia e técnicas de
visualização de microrganismos
TÉCNICAS FIXADAS E CORADAS:
 Coloração diferencial – Coloração de Gram
Escherichia coli
Salmonella sp
Shigella sp
Enterobacteriaceae
Sthaphylococcus sp
Clostridium sp
Pseudomonas sp
Bactérias
Quanto a coloração de Gram:
• Christian Gram (1884) classificou as bactérias em Grampositivas ou Gram-negativas;
• Neste procedimento as bactérias são submetidas à ação
de diferentes corantes e se coram de maneira diferente,
dependendo da parede celular.
Microscopia e técnicas de
visualização de microrganismos
TÉCNICAS FIXADAS E CORADAS:
 Coloração diferencial – Coloração de Gram
Violeta
30
Gram +:Violeta
Gram - :Incolor
Gram +:Violeta
Gram - :Rosa
Coloração de GRAM
Passar a lamina c/
esfregaço por 3x
Alça
sob a chama.
Fixação do
esfregaço pelo
calor
Bactériasisolada
Esfregaço
Técnicade GRAM
1. Cobrir lamina com cristal violeta e deixar por 1 min.
2. Escorrerexcesso do corante e lavar.
3.Cobrirlamina com Lugol e deixar por 1 min.
Proceder a coloração
de GRAM
4. Escorrerexcesso do corante e lavar.
5.Cobrirlamina com Eter-acetona e deixar por 30s.
6. Escorrerexcesso do corante e lavar.
7.Cobrirlamina com Fucsina e deixar por 30s.
8 . Escorrerexcessodo corante, lavar e deixar secar.
Fucsina
Coloração de Ziehl-Neelsen
Passar a lamina c/
esfregaço por 3x
sob a chama.
Colônias de
Micobactérias
Meio de cultura
para
Micobactérias
Usar capela de fluxo
laminar.
Esfregaço
Fixação do
esfregaço pelo
calor
a) Cobrir os esfregaço com fucsina de Ziehl. Aquecer até a emissão de
vapores (Não deixar o corante secar). Esperar 5 minutos;
b) Lavar com água corrente;
Resultado
c) Descorar com álcool (97%), ácido clorídrico (1%);
d) Lavar em água corrente;
e) Corar com azul de metileno por 1 minuto;
f) Lavar e secar;
g) Observar ao microscópio as lâminas coradas;
h) Como se apresentam os BAAR.
Proceder a coloração
de Ziehl-Neelsen