Como fazer a coloração de Gram

ASSOCIAÇÃO EDUCATIVA DO BRASIL - SOEBRAS
FACULDADE DE CIÊNCIAS HUMANAS DE CURVELO
Professor(a):
Ms. José de Oliveira Neto
Disciplina:
Microbiologia e Parasitologia
Curso:
Enfermagem
Período:
2°
Título: COLORAÇÃO DE GRAM
Valor:
Nome:
Nota:
ROTEIRO DE AULA PRÁTICA (Atenção: não se esqueça de fazer o relatório)
Introdução: A técnica de Gram é uma metodologia para coloração de material biológico, aplicável rotineiramente na prática médica, para
evidenciar bactérias. Assim, as bactérias são divididas, basicamente, em dois grandes grupos: Gram positivas e Gram negativas.
Objetivo: Ao final desta prática o aluno deverá ser capaz de:
a)
Entender a execução da coloração de Gram e sua importância na prática médica.
b)
Preparar uma lâmina com material biológico para coloração de Gram (urina, secreção vaginal, fezes, etc)
c)
Executar a coloração de Gram.
d)
Observar ao microscópio ótico comum e evidenciar as características morfotintoriais das bactérias.
e)
Desenvolver um relatório em grupo.
Material
1
lâmina para microscopia
1
micropipeta de até 50 L
1
ponteira 50 L
1
suporte para coloração de Gram
1
bico de Bunsen
1
micropipeta de 500 L
1
ponteira de L
1
pipeta graduada 5 Ml
1
pera repipetadora
1
alça microbiológica com cabo
Reagentes:
1
Conjunto para coloração de Gram
Equipamentos de Proteção Individual: 1
máscara microbiológica
1
par de luvas de látex
Procedimento:
Preparo dos materiais biológicos:
Urina
10 µL.
20 µL
10 µL.
20 µL
10 µL.
20 µL
Saliva
Vaginal
20 µL
Secreção
10 µL.
Fezes
Identifique 3 lâminas de microscopia, limpas e secas, e pipete, no lado oposto à identificação, as quantidades especificadas, como descrito abaixo:
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10 mL de urina.
Deixe secar
Antes de iniciar a coloração:

Confira se todos corantes necessários estão disponíveis.

Assegure-se de que o esfregaço esteja seco. Não fixe o esfregaço em chama, pois este processo promove a desidratação brusca dos
constituintes celulares. O CRISTAL VIOLETA já contém fixador químico:
1. Cubra o esfregaço com CRISTAL VIOLETA e deixe por aproximadamente 15 segundos;
2. Adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com CRISTAL VIOLETA e deixe agir por mais 45 segundos;
3. Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a lâmina com LUGOL diluído (1/20) e deixe agir por aproximadamente 1 minuto;
4. Escorra o LUGOL e lave em um filete de água corrente;
5. Adicione ÁLCOOL ETÍLICO (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante;
6. Lave em um filete de água corrente;
7. Cubra a lâmina com FUCSINA e deixe agir por aproximadamente 30 segundos;
8. Lave em um filete de água corrente;
9. Deixe secar ao ar livre, ou seque suavemente, com o auxílio de um papel de filtro limpo;
10. Coloque uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço; e
11. Leia em objetiva de imersão (100 X).
Conclusão:
Referência:
Brasilia: Ministério da Saúde, Técnica de Coloraçao de Gram. Programa Nacional de Doenças Sexualmente Transmissíveis e AIDS, 1997. 63 p.: iI.
(Série TELELAB) 1. Gram I. Programa Nacional de Doenças Sexualmente Transmissíveis e AIDS, (Brasil). II. Série TELELAB. Disponível em:
http://200.134.81.163/professores/adm/download/apostilas/235826.pdf. Acesso em: 24/02/10.
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