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Coloração de Gram
A técnica consiste basicamente nas
seguintes etapas:
Preparar uma lâmina de vidro com
uma fina camada de bactérias fixa
(esfregaço);
Cobrir o esfregaço com cristal
violeta por 1 minuto. Enxaguar em
água corrente;
Cobrir com lugol por 1 minuto.
Enxaguar em água corrente;
Descorar com solução de álcoolacetona
por
30
segundos.
Enxaguar em água corrente;
Contra-corar com safranina (ou
fucsina)
por
30
segundos.
Enxaguar em água corrente.
Deixar secar ao ar.
1884- Christian Gram = rápida, baixo custo de diagnóstico do tipo de parede celular da
bactéria em estudo
A coloração de Gram se
baseia
em
algumas
diferenças
estruturais
existentes entre a parede
celular de uma bactéria
Gram negativa e de uma
Gram positiva. A principal
delas é que a parede
celular de uma bactéria
Gram positiva, embora
mais
espessa,
é
quimicamente
mais
simples,
ou
seja,
apresenta
predominantemente um
único
tipo
de
macromolécula
(90%
peptidioglicano).
Já a parede celular de uma bactéria Gram negativa é mais complexa. É
formada por uma ou poucas camadas de peptidioglicano e por uma
membrana externa, separadas entre si por um espaço periplásmico,
contendo uma série de enzimas e proteínas. Enquanto nas Gram positivas o
peptidioglicano representa de 15 a 50% da massa seca da célula, nas Gram
negativas ele representa no máximo 5%.