Cronograma

MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO E DO
DESPORTO
UNIVERSIDADE DO AMAZONAS
PRÓ-REITORIA DE ENSINO DE GRADUAÇÃO
DEPARTAMENTO DE APOIO AO ENSINO
INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
HABILITAÇÃO: BIOLOGIA
ANO/SEM: 2010/01
AUTORIZAÇÃO:
RECONHECIMENTO:
CURRÍCULO PLENO
PLANO DE ENSINO
1. DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA
2. PROFESSOR RESPONSÁVEL
TITULAÇÃO
CATEGORIA
R.T.
Edmar Vaz de Andrade
Doutor
Adjunto I
DE
3. IDENTIFICAÇÃO
CÓDIGO
IBB223
NOME
CH
Fundamentos de
Engenharia Genética
60
CRÉDITOS
TEÓRICOS
PRÁTICOS
02
01
PRÉ-REQUISITO
4. OBJETIVO GERAL: ao término da disciplina o aluno terá conhecimento de:
-Técnicas de engenharia genética e suas aplicações em biotecnologia;
-Procedimentos de isolamento gênico;
-Síntese química de DNA;
-Obtenção de organismos transgênicos e clonagem gênica;
-Produção de proteínas recombinantes; e,
-Treinamento para apresentações orais, elaboração de trabalhos científicos e de pesquisa.
5. EMENTA
Histórico e perspectivas da engenharia genética. Principais instrumentos utilizados na
engenharia genética. Métodos de construção de moléculas recombinantes de DNA in vitro.
Diferentes sistemas de vetores e hospedeiras e procedimentos de transformação genética.
Clonagem de genes específicos. Síntese química de DNA. Mutagênese sítio dirigida e
seqüenciamento de DNA. Expressão de genes heterólogos em seres transgênicos. Uso da
engenharia genética em biotecnologia.
6. PLANEJAMENTO
MÊS
No. DE
AULAS
OBJETIVOS
CONTEÚDOS
PROGRAMÁTICOS
METODOLOGIA
AVALIAÇÃO
1. Aulas
expositivas
com recurso
de
multimídia
2. Aulas
práticas
1. Relatório de
aulas
práticas
2. Avaliação
teóricoprática com
questões
objetivas e
dissertativas
3. Discussão
de
resultados
com
questões
discursivas
a serem
respondidas
pelos
alunos em
forma de
seminários
Março
10
Entregar do programa. Discutir
sobre as atividades a serem
desenvolvidas no semestre.
Discutir sobre a estratégia de
isolamento gênico por PCR.
Cultivar
Chromobacterium
em meio líquido.
bactérias
violaceum
Obter de DNA genômico de
Chromobacterium
violaceum
com qualidade para isolamento
de fragmento gênico.
Abril
16
Desenhar
iniciadores
específicos para o isolamento
de genes por PCR.
Determinar a temperatura ótima
de anelamento para o par de
iniciadores.
Entrega do programa.
Discussão
sobre
as
atividades
a
serem
desenvolvidas
no
semestre.
Isolamento e clonagem de
genes a partir de PCR.
Obtenção
genômico
violaceum.
de
de
DNA
C.
Organização do genoma
de células procarióticas e
eucarióticas. Organização
de genomas virais.
Reação de PCR em
gradiente de temperatura.
Análise de DNA (PCR) por
eletroforese em gel de
agarose.
Maio
16
Amplificar fragmento gênico por
PCR.
Purificar o fragmento de PCR e
clonar o no vetor pGEMT-Easy.
Transformar
bactérias
Escherichia coli com o sistema
de ligação.
Conhecer sobre o uso de
enzimas de restrição em
Amplificação, purificação e
clonagem de fragmento
gênico por PCR.
Transformação bacteriana
com DNA plasmidial
recombinante.
Seleção e cultivo de
clones recombinantes.
clonagem gênica.
Conhecer sobre vetores de
expressão em Escherichia coli.
Junho
18
Extrair DNA plasmidial e
analisar por perfil de restrição.
Conhecer sobre vetores
expressão em eucariotos.
Analisar
proteínas
eletroforese
em
gel
poliacrilamida.
de
por
de
Seleção
de
clones
recombinantes por análise
por perfil de restrição.
Metodologia de análise de
proteínas por eletroforese
em gel de policrilamida.
CONTEÚDO PROGRAMÁTICO
Dia 16-03
Teórica (8h-10h): Discussão sobre o cronograma e conteúdo programático.
Teórica (10-12h): Não haverá aula.
Dia 23-03
Teórica (8h-10h): Discussão da estratégia experimental para isolamento de fragmento gênico por PCR.
Principais características de um vetor plasmidial.
Prática (10-12h): Repique/inóculo de bactérias Chromobacterium violaceum (ATCC12472 - American
Type Culture Collection).
Dia 30-03
Prática (8h-10h): Extração de DNA genômico C. violaceum.
Teórica/Prática (10-12h): Análise de DNA por eletroforese em gel de agarose.
Análise do DNA extraído na aula anterior (DNA genômico C. violaceum) por eletroforese em gel de
agarose.
Dia 06-04
Prática (8h-10h): Amplificação de DNA por PCR.
Teórica (10-12h): Desenho de iniciadores específicos para amplificação da região do gene phuA
(Ferrichrome iron).
Dia 13-04
Teórica (8h-10h): Construção de biblioteca genômica e de cDNA.
Prática (10-12h): Reação de PCR com gradiente de temperatura.
Dia 20-04
Prática/Teórica (8h-12h): Análise da reação de PCR (gradiente) por eletroforese em gel de agarose.
Amplificação da região do gene phuA por PCR (de acordo com a temperatura determinada pela PCR
em gradiente de temperatura).
Dia 27-04
Teórica (8h-12h): Primeira avaliação parcial.
Dia 04-05
Prática (8h-12h): Análise da reação de PCR por eletroforese em gel de agarose.
Purificação do fragmento gênico.
Quantificação do produto de PCR purificado por eletroforese em gel de agarose.
Dia 11-05
Teórica (8h-10h): Transformação bacteriana e seleção de clones recombinantes utilizando IPTG e XGAL.
Prática (10h-12h): Preparo do sistema de ligação (clonagem de promotor em vetor pGEMT-Easy).
Dia 18-05
Teórica (8h-10h): Utilização de enzimas de restrição em clonagens gênicas.
Prática (10-12h): Transformação de bactérias E. coli com o sistema de ligação.
Dia 25-05
Teórica (8h-10h): Vetores de expressão em E. coli.
Prática (10-12h): Análise da transformação. Repique de clones selecionados em meio líquido.
Dia 01-06
Prática (8h-10h): Extração de DNA plasmidial e análise em gel de agarose.
Prática (10-12h): Análise de DNA plasmidial por perfil de restrição (preparo dos sistemas).
Dia 08-06
Teórica (8h-10h): Sistemas de expressão em células eucarióticas.
Prática (10-12h): Análise de DNA plasmidial por perfil de restrição (eletroforese em gel de agarose).
Dia 15-06
Teórica/ Prática (8h- 12h): Análise de proteína por eletroforese em gel de poliacrilamida – SDS-PAGE.
Dia 22-06
Teórica/Prática (8h- 12h): Análise de proteína por eletroforese em gel de poliacrilamida – SDS-PAGE.
Discussão geral dos resultados com apresentação pelos alunos.
Dia 29-06
Teórica (8h-10h): Segunda avaliação parcial.
Dia 06-07
Teórica (8 h – 10 h): Prova final (entrega de relatório)
7. BIBLIOGRAFIA
1. LODISH, H; DARNELL, J. E. e BALTIMORE, D. 2005. “Biologia Celular e Molecular”, 5ª
edição. Artmed Editora SA. Porto Alegre-Brasil.
2. LEHNINGER, A. L. NELSON, D. L e COX, M. M. 2000. “Principles of Biochemistry”. 3ª Edition,
Worth Publitions.
3. ALBERT, B.; BRAY, D.; LEWIS, J. RAFF, M,; ROBERTS, K. e WATSON, J. D. “Biologia
Molecular da Célula”. Artes Médicas, Ed. Porto Alegre – RS. 1997 Tradução da 3ª
edição.
5. LEWIN, B. 1994. “Genes V” – Oxford University Press. New York – USA.
Turma 1 e Turma 2:
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Declaro estar ciente e de acordo com a ementa e plano de aula proposto para a disciplina de
Fundamentos de Engenharia Genética, código IBB223.
Manaus, 16 de março de 2010.