BQ023 - Setor de Ciências Biológicas

Ministério da Educação
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANÁ
Setor de Ciências Biológicas
Coordenação do Curso de Ciências Biológicas
PLANO DE ENSINO SIMPLIFICADO
Processamento e Purificação de Proteínas – BQ023
Departamento: Bioquímica
Setor:
Ciências Biológicas
Disciplina:
Processamento e Purificação de Proteínas
Código:
Natureza:
Anual
Semestral X
Carga Horária:
Teórica 02
Prática 02
Estágio 0
Pré-requisito:
Não tem
Co-requisito: Não tem
Ementa: (Unidade Didática):
BQ023
Total 60
Créditos 03
Precipitação (“Salting-out” e solvente), cromatografia e exclusão (peneira molecular ou gel permeação), cromatografia
de troca iônica, cromatografia de afinidade, cromatografia de interação hidrofóbica e em coluna de hidroxiapatita,
FPLC, HPLC, Ultracentrifugação, filtração através de membranas (ultrafiltração), diálise e eletrodiálise, eletroforese
em gel de poliacrilamida e isoetrofocalização, eletroforese bidimensional e caracterização de proteínas:
seqüenciamento, western blot e espectroscopia de massa.
Programa (os itens de cada unidade didática
 Propriedades fisico-químicas de proteínas
 Sistemas de super-expressão de proteínas
 Preparação de extrato livre células e protocolos solubilização de proteínas insolúveis
 Métodos de dosagem de proteínas
 Purificação de proteínas por cromatrografia de troca-iônica
 Purificação de proteínas por cromatrografia de afinidade
 Purificação de proteínas por cromatrografia em coluna de gel filtração
 Purificação de proteínas por cromatrografia de interação hidrofóbica e coluna de
hidroxiapatita
 Diálise, ultracentrifugação e técnica para concentração de proteínas.
 Sistema FPLC e HPLC
 Eletroforese de proteínas: nativa, desnaturante, isoeletrofocalização e eletroforese
bidimensional
 Caracterização de proteína por Western-blot
Procedimentos didáticos
Lista
de
Exercícios,
retroprojeção
e
Seminários
 Sequenciamento e caracterização de proteínas por espectroscopia de massa
Objetivos (competência do aluno):
Ao final do curso o aluno deverá ser capaz de construir um plasmídeo para super-expressar uma proteína de
interesse e planejar corretamente o protocolos de indução de expressão. Além disso, o aluno deverá entender
os princípios teóricos e práticos de cada tipo de cromatrografia líquida que pode ser usada para purificação de
proteínas e planejar os protocolos de purificação, além de contornar problemas de baixa taxa de expressão e
solubilidade de proteínas. O aluno também deverá ser capaz de entender os processos de caracterização de
proteínas através de sequenciamento, espectroscopia de massa e wethern blot.
Referências Bibliográficas:
SCOPES, R. S. Protein Purification: Principles and Practice. 2ed.
DEUTSCHER, M. Guide to Protein Purification. Methods in Enzymology Series, Vol 182. 1ed.
Artigos científicos selecionados pelo professor.
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