Microscopia e Método de Coloração Bacteriana
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Microscopia e Método de Coloração Bacteriana MICROSCOPIO DE LUZ: 1000 a 1500 x Até 5000 x 1 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana MICROSCOPIO DE LUZ : Partes do Microscópio de Luz: 2 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 3 MICROSCOPIO DE LUZ: • Bacterioscopia ao Microscópio de Luz: Preparação “a fresco” Preparação “coradas” Diâmetro da célula bacteriana: 1 a 2 micrômetros 1 micrômetro = 1 m = 10-6 m Bactéria 1-2 m = 1-2 x 10-6 m Microscópio Luz 1000 x (103) Bactéria = 10-3 m = 1 a 2 mm Microscopia e Método de Coloração Bacteriana MICROSCOPIO DE LUZ: Aumento de 1000 x no Microscópio de Luz: Objetiva de Imersão: Ar Água 4 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 5 MICROSCOPIA ELETRÔNICA: Microscópio Eletrônico de Transmissão Descoberto em 1932 ME Transmissão (MET): 1.000.000 x ME Varredura (MEV): 10.000 x Microscopia e Método de Coloração Bacteriana MICROSCOPIA ELETRÔNICA: ME Transmissão ME Varredura 6 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 7 MICROSCOPIA ELETRÔNICA: Microscópio Eletrônico Transmissão Microvilosidade Bactéria Estudo da ultraestrutura celular; Envoltórios Microeletronografia Bactéria Microeletronografia Colorizada Enterócito Vermelho: DNA Genômico Microscopia e Método de Coloração Bacteriana MICROSCOPIA ELETRÔNICA: Microscópio Eletrônico Varredura Estudo da morfologia da célula; 8 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana MICROSCOPIA ELETRÔNICA: Microscópio Eletrônico Varredura 9 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana Os Métodos de Coloração Facilitam a Visualização dos Microrganismos ao Microscópio Óptico Preparação “a fresco” Preparação “corada” Caracterização da Morfologia da Bactéria 10 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 11 MÉTODOS DE COLORAÇÃO DIFERENCIAIS: Método de Coloração Diferencial Morfologia Identificação Reação Tintorial Método de Coloração de Gram: Coco Bastonete Reação Positiva Reação Positiva Agrupados Predominantemente em Cachos de Uvas Staphylococcus Bacillus Esporulado Clostridium Método de Coloração de Ziehl-Neelsen: : Bastonete Reação Positiva Micobactérias (Gênero Mycobacterium) M. leprae M. tuberculosis Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 12 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM: Solução de Cristal Violeta Solução de Iôdo de Gram (Lugol) Solução de Álcool Etílico 95% ou Acetona Solução de Safranina ou Fucsina Diluída 1 minuto 1 minuto “o suficiente” 30 seg Corante Mordente Descorante Corante Interpretação do Resultado: Reação Positiva = Roxo Reação Negativa = Rosa Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 13 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM: Hipóteses que Explicam a Diferenciação das Bactérias: Espessura da Camada de Peptidioglicano: ParedeCelular Membrana Celular Gram Positiva Gram Negativa Desorganização da Membrana Externa das Bactérias Gram Negativas pelo Diferenciador (Solvente Orgânico): Presença de Ácidos Teicóicos nas Bactérias Gram Positivas ; Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 14 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM: Cocos Gram positivo agrupados em cachos de uva Cocos Gram positivo agrupados em cadeias Cocos Gram positivo agrupados em tétrades Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 15 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM: Cocos Gram positivo agrupados 2 a 2 (diplococos) Bastonetes Gram positivo não esporulados Bastonetes Gram positivo esporulados Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 16 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM: Bastonetes Gram lábeis não esporulados Cocos Gram negativo agrupados 2 a 2 (diplococos) intra e extracelulares Bastonetes (cocobacilos) Gram negativo Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 17 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN: Solução de Fucsina de Ziehl-Neelsen, fenicada, concentrada à quente por 5 min Corante Interpretação do Resultado: Solução Álcool Ácida Solução de Azul de Metileno Descorante Corante Reação Positiva = Vermelha Reação Negativa = Azul BAAR= Bacilo ÁlcoolÁcido Resistente Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 18 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN: Hipóteses que Explicam a Diferenciação das Bactérias: Composição da Parede Celular das Micobactérias: Polipeptídios (Ex.: tuberculina) Lipídios Livres (Ex.: fator corda, ceras, micosídios ) D-arabinose e D-galactose Ácidos Micólicos Camada Micolato Arabinogalactano Camada de Peptidioglicano Citoplasma Membrana Citoplasmática Ácido D-glutâmico - Ac. m-diaminopimélico e L-alanina Microscopia e Método de Coloração Bacteriana MÉTODO DE COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN: Tuberculose Hanseníase Globia 19 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana Doença em foco: Tuberculose 20 Tuberculose Doença Renal M. tuberculosis Tuberculose Infecção Disseminação Cura Tuberculose Doença Transmissão por Via Aérea Vacina BCG Teste do PPD da Tuberculina Tuberculose Doença Óssea Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 21 Doença em foco: Hanseníase Alteração da Sensibilidade: Térmica Táctil Dolorosa M. leprae Forma de Transmissão Formas Clínicas Multibacilar Indeterminada Tuberculóide Sadio Dimorfa Virchowiana Secreções do Trato Respiratório Superior Teste da Lepromina ou Mitsuda
