Análise de polimorfismos de nucleotídeos na seqüência do gene

51º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 51º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2005
Hotel Monte Real • Águas de Lindóia • São Paulo • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-05-4
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Palavras Chave: Cryptococcus neoformans, gene ERG11, polimorfismo
Fernandes, FF1; Pereira, MGAG2; Dias, ALT3; Cannavan, FS4; Tsai, SM4; Franco, MC1
Departamento de Ciências Biológicas – Efoa/Ceufe, Alfenas, MG 2Departamento de Bioquímica e Imunologia – FMRP/USP, Ribeirão
Preto, SP; 3Departamento de Microbiologia, Instituto de Ciências Biomédicas II, USP, São Paulo; 4Centro de Energia Nuclear na
Agricultura – ESALQ/USP, Piracicaba, SP.
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Análise de polimorfismos de nucleotídeos
na seqüência do gene ERG11 entre
as variedades neoformans e grubii
de Cryptococcus
C. neoformans é o fungo causador da criptococose, que dentre as infecções oportunistas que acometem
pacientes HIV positivos, é a quarta causa mais freqüente de infecção. Em resposta aos anticorpos
monoclonais, as amostras manifestam cinco distintos sorotipos A, B, C, D e AD, que anteriormente se
agrupavam em duas variedades, neoformans e gattii, mas atualmente, existe uma proposta controversa
de criação de uma nova variedade, a grubii. Os pacientes com criptococose necessitam de terapia
prolongada, sendo indicado o fluconazol. O principal alvo dos azólicos é a citocromo P450 - lanosterol14�-demetilase, codificada pelo gene ERG11. Existem relatos da resistência ao fluconazol em isolados
de Candida sp e C. neoformans relacionada a modificações na citocromo P450. A existência de variações
genética entre isolados de um determinado patógeno é importante porque ela pode se traduzir em
variações fenotípicas, tais como diferenças em virulência, ou na susceptibilidade aos agentes terapêuticos.
Além disto, podem mostrar diferenças a nível molecular existentes entre os isolados de diferentes
variedades contribuindo para esclarecer a proposta de criação da var. grubii. No presente trabalho
objetivamos identificar polimorfismos pela comparação das sequências do gene ERG11 de isolados
de Cryptococcus das var. grubii e neoformans depositadas no Genbank. As seguintes seqüências do gene
ERG11 e da proteína foram obtidas do Genbank: AF225914 (var. neoformans) e AY265353 (var. grubii).
As análises das sequências foram realizadas através dos programas Blastn, Blastp e ClustalW. Através
do Blastn foi observado 92% de similaridade entre as duas seqüências de nucleotídeos analisadas. O
Blastp identificou similaridade de 96% entre as sequências de aminoácidos. Pelo Clustal W verificouse polimorfismo de 168 nucleotídeos entre as seqüências do isolado da var. neoformans e grubii, sendo
que 76,8% (129/168) são alterações do tipo transição e 23,2% (39/168) do tipo transversão. Ainda
pelo Clustal W foi observado que a proteína, do GeneBank, codificada pela var. neoformans possui três
aminoácidos a mais na região terminal do último éxon. Foi verificado polimorfismo de onze aminoácidos
(2%) entre as duas seqüências. Estes polimorfismos encontrados nas seqüências de nucleotídeos e
aminoácidos, possivelmente, estão relacionados com a variedade e não com resistência a azólicos, pois
estas alterações estão distribuídas ao acaso em toda a seqüência do gene. Para confirmação do possível
polimorfismo nas seqüências de nucleotídeos e aminoácios entre as variedades são necessárias novas
análises com maior número de isolados, sensíveis aos azólicos.
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