Resumos do 49° Congresso Brasileiro de Genética Águas de

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Resumos do 49° Congresso Brasileiro de Genética
Águas de Lindóia, SP, 16 a 19 de Setembro de 2003
www.sbg.org.br
SEQUENCIAMENTO DE FR AGMENTOS DE DNA BOVINO REVELA HOMOLOGÍA COM REGIÃO
DO GENE FMR-1 EM MAMÍFEROS.
Llambí, S1 ; Rodríguez, V 2; Calvo, T3 ; Arruga, MV 4
1. Área Genética. Faculdade de Veterinária. UDELAR-Uruguai. 2. Laboratório de Citogenética e Genética
Molec ular Humana. FMRP- USP. São Paulo- Brasil. 3. Laboratório Genética Hospital Infantil Miguel Servet.
Zaragoza- Espanha. 4. Laboratório de Citogenética e Genética Molecular. Faculdade de Veterinária. UNIZAR Espanha.
[email protected]
Palavras-Chave: Bovino, seqüenciamento, gene FMR-1.
Em humanos alterações no número de trinucleotídeos (repetições CGG) no extremo 5´ do gene FMR1 estão relacionados com a síndrome de X frágil (FRAXq27.3). Este gene tem sido seqüenciado em
diversas espécies de mamíferos (roedores, cães, primatas). No cromossomo sexual X de boi (B os
taurus taurus) tem identificado a presença de sítios frágeis relacionados com alterações reprodutivas.
Devido ao cromossomo X apresentar um alto grau de conservação de genes na escala evolutiva dos
mamíferos (Teoria de Ohno), nosso objetivo foi estudar seqüências do gene FMR -1 em bovinos.
Foram analisadas as seqüências nucleotídicas de fragmentos, obtidos depois da amplificação por
PCR, nas amostras de DNA extraído de leucócitos de bovinos da raça Holandesa (N=9 animais).
Para a amplificação do PCR utilizou-se 2 pares de oligonucleotídeos específicos do gene FMR -1
humano que flanqueiam a região de repetições do trinucleotídeo CGG identificados como P4/P6 e
FRAX-A1/FRAX-A2. As condições da PCR para o primeiro par de oligonucletídeos foram de : 35
ciclos de 95ºC-1’ -70ºC-2’-72ºC-1’- e para o segundo par de oligonucleotídeos: 35 ciclos de 95ºC-1’56ºC -1’ -72ºC -2’ em ambos casos realizou-se uma desnaturação do DNA a 95ºC e a extensão final de
72ºC. Com o par P4/P6 obteve e isolou -se do gel de agarose 2%, uma banda de 250-350pb e com o
par FRAX-A1/FRAX-A2 obteve e isolou-se uma banda de 200pb. Em 4 animais procedeu o
seqüênciamento automático (Applied Biosystems, USA) das duas cadeias das bandas, obtendo
seqüências de 196pb (número de aceso ao GenBank AF323120). As seqüências foram analisadas
no programa BLAST (National Center for Biotechnology Information home page) mostrando
homologia com seqüências do gene FMR-1 de Mus músculus (92%), Homo sapiens (89%), Macaca
arctoides (88%), Pan troglodytes (88%), Canis familiaris (88%). Nas seqüências analisadas
encontrou -se a presença do trinucleotídeo CGG (número de repetições=4) não observando variação
no número de r epetições nos animais estudados.
Apoio Financeiro: UNIZAR, AECI, CSIC- UDELAR, FAEPA.
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