BB 04. Avaliação da interferência de polietileno glicol e sulfato de

BB 04. Avaliação da interferência de polietileno glicol e sulfato de sódio na validação de
metodologias de quantificação de albumina de soro bovino
Lucas Ragnini Henares1, Camila Lopes1,2, Jorge Fernando Brandão Pereira1.
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Faculdade de Ciências Farmacêuticas, UNESP. 2Unifal.
Introdução: As proteínas são consideradas bioprodutos com grande interesse industrial,
principalmente para as indústrias farmacêuticas. São produzidas essencialmente por processos
fermentativos, necessitando de etapas de purificação conseguintes, como a extração líquidolíquido em sistemas aquosos bifásicos (SABs). Apesar da sua extração ter sido muito estudada,
quando recuperadas a partir de meios fermentados, a quantificação de proteínas é um dos fatores
que limita a otimização dessas etapas. Desse modo, a escolha dos métodos adequados para a
quantificação de proteínas é fundamental nesse processo. Assim, foram avaliadas possíveis
interações entre albumina de soro bovino (BSA) e dois agentes formadores de fase de SABs, a
fim de verificar se tais interações afetavam as quantificações por métodos convencionais.
Objetivo: Este trabalho objetivou avaliar as interferências de polietileno glicol (PEG) e sulfato
de sódio (Na2SO4) na quantificação de BSA por dois diferentes métodos de quantificação de
proteínas, para posterior avaliação da extração de proteínas utilizando SABs. Metodologia:
Foram preparadas soluções aquosas de BSA (2 mg/mL) com concentrações diferentes de PEG600 e Na2SO4, (entre 10 e 30% m/m). Essas soluções foram posteriormente diluídas em tubos
eppendorf com 2 ml de amostra nas seguintes concentrações (mg/ml): 0,1; 0,3; 0,5; 0,7; 0,9; 1,1.
e então utilizadas para determinar as curvas de calibração de dois métodos de quantificação:
Método de Bradford (595 nm) e Método de absorção do UV (280 nm). Água Milli-Q foi
utilizada como referência em ambos os métodos. Para avaliar as interferências, as curvas de
calibração da BSA com o sal e com o PEG foram comparadas com a curva de calibração
contendo apenas BSA. Resultados e Discussões: Os resultados obtidos para o método de
Bradford mostraram que o PEG-600 inibe a reação do reagente de Bradford com a proteína, não
sendo possível a quantificação por este método (visualmente comprovado pela não mudança de
coloração de marrom para o azul), entretanto, o teste com Na2SO4 está em processo de
desenvolvimento. Os resultados referentes ao método de absorção no UV a 280 nm mostraram
que o PEG-600 não gera um padrão de interferência, sendo os valores de absorbância obtidos
em diferentes concentrações de polímero aproximadamente os mesmos. O Na2SO4 apresentou
uma pequena variação na tendência das curvas (até 20% de variação relativamente à referência),
porém não impediu a utilização desse método de quantificação. Conclusão: Os resultados
demonstraram que a leitura por absorbância UV das soluções de BSA com polímeros ou sais a
280 nm pode ser uma metodologia válida para a quantificação de proteínas. No entanto, estudos
posteriores com outros agentes formadores de fase, como outros polímeros ou sais, Líquidos
Iônicos (LI) e tensoativos, devem ser realizados para confirmar a aplicabilidade desta
metodologia em todos os processos de separação que utilizam SABs para a purificação de
biofármacos.
Palavras-chave: Polietileno glicol, Sulfato de sódio, Albumina de Soro Bovina.