Perfil de ativação de neutrófilos e macrófagos após estimulação por

Perfil de ativação de neutrófilos e macrófagos após estimulação por
Streptococcus pneumoniae e Staphylococcus aureus isolados de
paciente com otite média crônica.
Rayssa P. Fonseca1, Jacqueline A. do Nascimento2,
Hayana R. Lima2, Ana P. Campanelli2
1. Universidade Paulista
2.Faculdade de Odontologia de Bauru, Universidade de São Paulo
Neutrófilo
Macrófago
100
50
0
S.aureus
S.pneumoniae
Figura 1: Análise da fagocitose de S. aureus e S. pneumoniae por
neutrófilos e macrófagos.
40
80
A
B
Resultados
Os resultados mostram a maioria dos
macrófagos e neutrófilos humanos são capazes de
fagocitar S. aureus e S. pneumoniae in vitro (Figura 1).
Em relação à síntese de mediadores
inflamatórios, a produção de NO por macrófagos
estimulados com S. aureus (1 célula: 10 bactérias) foi
estatisticamente maior que os demais estímulos
(Figura 2B). Os neutrófilos estimulados com S aureus
e S pneumoniae não apresentaram diferenças nos
níveis de produção de NO (Figura 2A). A produção de
TNF-α foi estimulada por S. pneumoniae em
neutrófilos, mas a produção desta citocina por
macrófagos foi detectada apenas quando estas
células foram estimuladas com S. aureus (Figura 1C e
D).
LP
S
5:
1
10
:1
Sp
Sp
5:
1
ei
o
40
Sa
M
1:
5
LP
S
1:
10
Sp
Sp
Sa
1:
5
M
Sa
1:
10
0
ei
o
20
0
10
:1
40
10
Sa
NO (M)
20
10
D
TNF- (pg/mL)
20
10
6
4
2
LP
S
10
:1
5:
1
Sp
Sp
5:
1
10
:1
Sa
ei
o
LP
S
10
:1
Sp
5:
1
Sp
Sa
Sa
10
:1
0
5:
1
0
8
M
TNF- (pg/mL)
C
30
ei
o
Neutrófilos e monócitos foram isolados do
sangue periférico de indivíduos saudáveis. Os
monócitos foram cultivados até se diferenciarem em
macrófagos. Para o ensaio de fagocitose, as células
foram estimuladas com S. aureus (Sa, ATCC 6538) e
S. pneumoniae (Sp, ATCC 49169) viáveis por 40
minutos e foi determinado o número de células em
fagocitose. Os neutrófilos e macrófagos foram
estimuladas com S. aureus e S. pneumoniae
inativados pelo calor por 21 horas e 24 horas,
respectivamente e LPS de E. coli (10ng/mL). A
produção de óxido nítrico (NO) e concentração de
TNF-α foram avaliadas no sobrenadante da cultura
das células, através da reação de Griess e por ELISA,
respectivamente.
*
60
M
Métodos/Procedimentos
NO (M)
30
Sa
A orelha média costuma ser acometida por
infecções causadas por bactérias como Streptococcus
pneumoniae e Staphylococcus aureus. A resposta
imune contra tais microrganismos é efetuada
inicialmente por fagócitos. Portanto, foi avaliado o
perfil de ativação de neutrófilos e macrófagos
humanos desafiados por diferentes isolados de S.
aureus e S. pneumoniae.
Fagocitose (%)
Objetivos
Figura 2: Dosagem da concentração de NO e TNF-α dos sobrenadantes de
cultura de macrófagos e neutrófilos estimulados com S. aureus e S.
pneumoniae. Neutrófilos e macrófagos foram cultivados com S. aureus (Sa) e
S. pneumoniae (Sp), na concentração de 1 célula para 10 ou 5 bactérias e
LPS (10ng/mL). Após 21h (neutrófilos, A e C) e 24 h (macrófagos, B e D), os
sobrenadantes das culturas foram obtidos e os níveis de NO e TNF-α foram
determinados. As barras representam a média ± erro padrão da concentração
de TNF-α. *p<0,05 por ANOVA one-way e pós-teste de Tukey.
Conclusões
Os resultados apresentados indicaram que
neutrófilos e macrófagos fagocitam S. aureus e S.
pneumoniae. Estas bactérias também ativam
neutrófilos e macrófagos de modo distinto e induzem a
produção de mediadores inflamatórios por tais
fagócitos.
Referências Bibliográficas
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pneumoniae virulence factors in host respiratory colonization and disease. Nat
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