HbA1C - TURBIDIMETRIA - Gold Analisa Diagnóstica

HbA1C - TURBIDIMETRIA
Kit para determinação da HbA1C por imunoturbidimetria.
Cat. 405
MS 80022230132
MÉTODO
Imunoturbidimetria.
FINALIDADE
Reagentes para determinação específica da fração HbA1C da hemoglobina
glicada no sangue total. Somente para uso diagnóstico in vitro.
FUNDAMENTO
O sangue total é hemolisado e a concentração de hemoglobina A1C (HbA1C) é
determinada através de uma metodologia imunoturbidimétrica de inibição.
Inicialmente, há formação de complexos solúveis (anticorpo-HbA1C) pela
adição do hemolisado (antígeno) ao reagente contendo os anticorpos de cabra
anti-HbA1C (anticorpo).
Em seguida, com a adição do reagente contendo os polihaptenos (aglutinante),
os anticorpos anti-HbA1C excedentes na reação formam complexos insolúveis
(anticorpo-polihapteno) que são medidos por turbidimetria.
A porcentagem de hemoglobina glicada A1C (HbA1C) é calculada em função da
concentração de hemoglobina total que é determinada por espectrofotometria.
SIGNIFICADO CLÍNICO
A hemoglobina glicada (Hb-G) resulta da fixação não enzimática da glicose ao
aminoácido valina terminal da cadeia beta da hemoglobina.
Em adultos normais temos 97-98% de Hb-A, 2,5% de Hb-A2 e 0,5% de Hb-F.
Através de análise cromatográfica da Hb-A identifica-se uma variedade de
outras hemoglobinas: HbA1A, HbA1B e HbA1C.
A fração HbA1C ou apenas A1C corresponde à hemoglobina glicada propriamente
dita, cujo terminal valina da cadeia beta éstá ligado à glicose através de uma
ligação estável e irreversível. Sua concentração reflete na realidade a média
ponderada dos níveis glicêmicos de 60 a 90 dias antes do exame.
A formação da Hb-G é irreversível e ocorre muito lentamente durante toda a
sobrevida das hemácias (120 dias).
A intensidade de glicação depende diretamente do valor da glicemia, do tempo
de exposição das hemácias à glicose e também varia de paciente para paciente.
Vários trabalhos científicos têm confirmado a utilidade da determinação da Hb-G
para avaliar o nível de controle da glicemia nos pacientes diabéticos. Deste
modo, a dosagem da Hb-G é muito usada para monitorar a eficácia da
terapêutica aplicada aos diabéticos, bem como para verificar a adaptação do
paciente à terapia proposta.
Em pacientes diabéticos em estado de descontrole metabólico submetidos a
tratamento e que passam a ter níveis adequados de glicemia, observa-se uma
redução progressiva da Hb-G, que atinge um ponto de equilíbrio depois de 6 a 8
semanas. Assim, é correto dizer que uma dosagem da Hb-G reflete os níveis
glicêmicos da sexta ou oitava semana precedente ao teste.
Um resultado de Hb-G nos valores de referência assegura que o paciente tem
estado sob controle metabólico adequado por várias semanas e exclui mesmo
uma perda temporária do controle durante este período.
Resultados elevados de Hb-G podem significar um controle metabólico
inadequado por todo o período ou parte dele. Níveis persistentemente elevados
da Hb-G indicam controle inadequado da glicemia.
Estudos do DCCT (Diabetes Control and Clinical Trial) demonstraram que a
morbidade ou mortalidade de pacientes diabéticos diminui quando há um
controle adequado da glicemia e que a dosagem da Hb-G é muito importante
para informar o estado desse controle.
QUALIFICAÇÕES DO PRODUTO
· Metodologia para determinar especificamente a fração HbA1C
da
hemoglobina glicada.
· A metodologia imunoturbidimétrica de inibição empregada fornece resultados
com excelente precisão e exatidão.
IDENTIFICAÇÃO DOS REAGENTES
Conservar entre 2-8 ºC
1- Hemolisante - Contém brometo de TTAB 9,0 g/L.
2- Tampão - Contém tampão fosfatos 20 mmol/L, pH 7,4.
3- Anticorpo - Contém tampão MES 25 mmol/L, tampão TRIS 15 mmol/L e
anticorpos de cabra anti-HbA1C, pH 6,2.
4- Aglutinante - Contém tampão MES 25 mmol/L, tampão TRIS 15 mmol/L,
polihapteno HbA1C ≥ 8 µg/mL, pH 6,2.
5- Padrão - Contém sangue humano, sangue ovino e TTAB 80 g/L.
TTAB = Tetradeciltrimetilamonio / TRIS = Tris(hidroximethil)aminometano
MES = Ácido 2-[N-Morfolino]etanosulfônico].
Atenção
As concentrações de HbA1C e de hemoglobina total vêm indicadas no rótulo do
frasco de Padrão em mmol/L.
As concentrações de hemoglobina glicada (HbA1C) e de hemoglobina total no
padrão são rastreáveis ao método de referência padronizado pela IFCC
(Federação Internacional de Química Clínica).
Estabilidade
Os reagentes são estáveis até o vencimento da data de validade impressa no
rótulo quando conservados bem vedados na temperatura recomendada. Evitar a
contaminação do produto durante o uso para não afetar a sua estabilidade.
Sinais de Deterioração dos Reagentes
Hemolisante: Presença de partículas e turbidez.
Tampão: Absorbância do Branco de hemoglobina total superior a 0,010
em 560 nm.
Anticorpo e Aglutinante: Absorbância do Branco de HbA1C inferior a 0,850 em
340 nm.
Padrão: Presença de umidade.
Preparo dos Reativos
Os reativos 1 (Hemolisante), 2 (Tampão), 3 (Anticorpo) e 4 (Aglutinante) estão
prontos para uso.
Preparo do Padrão
Reconstituir o Padrão (5) liofilizado com 2,0 mL de água deionizada. O Padrão
reconstituído é estável por 3 meses a 20 ºC negativos, 2 dias entre 2-8 ºC e por 8
horas na temperatura ambiente. Congelar somente uma vez.
MATERIAIS NECESSÁRIOS E NÃO FORNECIDOS
· Espectrofotômetro (leitura em 340 e 560 nm);
· Tubos e pipetas;
· Cronômetro.
PRECAUÇÕES E CUIDADOS ESPECIAIS
· Aplicar os cuidados habituais de segurança na manipulação dos reagentes e
amostra biológica.
· Recomendamos o uso das Boas Práticas em Laboratório Clínico para a
execução do teste.
· De acordo com as instruções de biossegurança, todas as amostras devem ser
manuseadas como materiais potencialmente infectantes.
· O Padrão é irritante. Evitar contato com os olhos, pele ou mucosas. Não
aspirar ou ingerir. Por ser derivado do sangue humano, o padrão é
potencialmente infectante, devendo ser manuseado com precaução. Os testes
para anticorpos anti-HCV, anti-HIV e antígeno HBsAg realizados com o mesmo
apresentaram resultados negativos. Manusear e descartar segundo as normas
de biossegurança.
· Todo o material contaminado deve ser autoclavado por 1 hora a 120 ºC ou
deixado em solução de hipoclorito de sódio a 10% por 1 hora.
· Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resoluções
normativas locais, estaduais e federais de preservação do meio ambiente.
AMOSTRA
Sangue total capilar ou venoso coletado com EDTA ou heparina.
No sangue, a HbA1C é estável por 3 dias entre 15 - 25 ºC, 7 dias entre 2-8 ºC
e 6 meses na temperatura de -20ºC.
PROCEDIMENTO DO TESTE
Notas
1- Este kit pode ser utilizado na maioria dos analisadores automáticos.
O consumidor poderá solicitar mais informações através do Setor de Apoio ao
Cliente (SAC) ou acessando o site www.goldanalisa.com.br
2- Para evitar possíveis interferências com outros ensaios, é recomendável
dosar a HbA1C e a hemoglobina total em série, independente de outros ensaios.
3- Recomenda-se calibrar o teste, pelo menos, a cada 2 meses, após mudança
de lote de reagente ou quando houver indicação dos procedimentos de controle
de qualidade.
A- Preparo do Hemolisado
1- Deixar o Hemolisante (1) atingir a temperatura ambiente.
2- Em um tubo de ensaio, pipetar:
10 µL de sangue total homogeneizado + 1000 µL de Hemolisante (1).
3- Agitar ligeiramente, evitando a formação de espuma. O hemolisado estará
pronto para uso quando a cor passar do vermelho para marrom esverdeado
(aproximadamente 3 minutos).
O hemolisado é estável por 1 dia entre 2-8 ºC, por 4 horas entre 15-25 ºC e por 6
meses a -20 ºC. Congelar somente uma vez.
Atenção: Não hemolisar o Padrão.
B- Calibração da Hemoglobina Total
Branco: Fazer o Branco de Reagente com solução de cloreto de sódio a 0,9%.
Calibrador: Usar o Padrão do kit. A concentração de hemoglobina total para os
cálculos é a indicada no rótulo do frasco de Padrão (5).
C- Calibração da Hemoglobina Glicada A1C (HbA1C)
Branco: Fazer o Branco de Reagente com solução de cloreto de sódio a 0,9%.
Calibrador: Usar o Padrão do kit.
1-Preparar diluições do Padrão (5) já dissolvido, empregando solução salina
0,9%, da seguinte maneira:
Diluição
Padrão (L)
Solução Salina (L)
Fator
1
30
210
0,125
2
60
180
0,25
3
120
120
0,5
4
180
60
0,75
5
240
1
Para obter a concentração de HbA1C das respectivas diluições, multiplicar o
valor de concentração de HbA1C do Padrão (5) pelo Fator de Diluição
correspondente (Ver Tabela acima). A concentração de HbA1C do Padrão está
indicada no rótulo do frasco.
Exemplo
Se a concentração de HbA1C do Padrão é igual a 1,686 mmol/L.
Multiplicar 1,686 mmol/L x Fatores de diluição: 0,125 0,25 0,5 0,75 e 1,0
Assim sendo, as concentrações de HbA1C em mmol/L nas respectivas diluições
serão: 0,211 / 0,422 / 0,843 / 1,265 / 1,686.
Curva de Calibração
Representar graficamente os valores de absorbância de cada ponto do padrão
face à respectiva concentração de HbA1C em mmol/L.
Utilizar o Branco de Reagente como Padrão de concentração zero.
As concentrações de HbA1C dos testes são calculadas por interpolação das
absorbâncias na curva de calibração.
AUTOMAÇÃO
Este kit pode ser utilizado na maioria dos analisadores automáticos.
O consumidor poderá solicitar mais informações através do Setor de Apoio ao
Cliente (SAC) ou acessando o site www.goldanalisa.com.br
Cálculo da Concentração de Hemoglobina Glicada da Amostra
A concentração de HbA1C dos testes na unidade recomendada pela IFCC
(mmol/mol) é calculada através da seguinte fórmula geral:
mmol/mol de HbA1C - IFCC = (mmol/L de HbA1C x 1000) ÷ mmol/L de Hb Total
Exemplo
Se HbA1C = 0,120 mmol/L e Hb Total = 5,600 mmol/L
HbA1C - IFCC = (0,120 x 1000) ÷ 5,600 = 120 ÷ 5,600 = 21 mmol/mol
Nota
Para obter os valores rastreáveis ao método de referência descrito pelo NGSP
(US National Glycohemoglobin Standartization Program) aplicar a seguinte
fórmula:
% HbA1C-Método NGSP = (mmol/mol HbA1C-Método IFCC x 0,0915) + 2,15
Exemplo
Se HbA1C-Método IFCC = 21 mmol/mol
HbA1C-Método NGSP em % = (21 mmol/mol x 0,0915) + 2,15
HbA1C-Método NGSP em % = 4,07 % ≈ 4,1 %
Cálculo da Concentração Média Estimada de Glicose - CMGe
A concentração de hemoglobina glicada (HbA1C) no sangue é diretamente
proporcional à concentração média estimada de glicose (CMGe) durante o
período de 6 a 8 semanas, equivalente à vida média das hemácias.
Deste modo, a CMG estimada pode ser calculada como segue:
1- CMGe (mg/dL) = (28,7 x % de HbA1C-NGSP ) - 46,7
2- CMGe (mg/dL) = (2,64 x mmol/mol de HbA1C-IFCC ) + 15
Exemplos
1- Se HbA1C-NGSP = 4,1%
CMGe (mg/dL) = (28,7 x 4,1 ) - 46,7 = 71 mg/dL
2- Se HbA1C-IFCC = 21 mmol/mol
CMGe (mg/dL) = (2,64 x 21 ) + 15 = 70 mg/dL
VALORES DE REFERÊNCIA
Os valores apresentados abaixo foram estabelecidos pelo DCCT (Diabetes
Control and Complications Trial Research Group) e são aceitos em vários países
para a população não diabética e para avaliação do grau de controle da glicemia
em pacientes diabéticos.
HbA1C – IFCC
mmol/mol
20 a 48
42 a 53
53 a 64
> 64
Grau de Controle Glicêmico
1- Não diabéticos
2- Diabéticos – Meta do tratamento
3- Diabéticos com bom controle glicêmico
4- Diabéticos com controle glicêmico ruim
HbA1C – NGSP
%
4,0 a 6,5
6,0 a 7,0
7,0 a 8,0
> 8,0
LINEARIDADE
Para Hb total a linearidade é até 24,8 mmol/L e para a HbA1C é até 1,61 mmol/L,
dependendo da concentração do Padrão mais elevado. Para valores acima das
linearidades estabelecidas, diluir o hemolisado a 1/2 com o Hemolisante e dosar
as duas frações (HbA1C e Hb Total). Multiplicar os resultados por 2.
CONTROLE DA QUALIDADE
Para controle e verificação do desempenho do produto recomenda-se utilizar
controles de HbA1C de valor normal e alto para verificar a funcionalidade do
sistema. A Gold Analisa sugere a todos os usuários a implementação das Boas
Práticas de Laboratório para a obtenção de resultados exatos e precisos, e que
mantenham um programa de controle interno e externo de qualidade.
7
CARACTERÍSTICAS DO DESEMPENHO
Repetibilidade (Variação Intra-Ensaio)
A repetibilidade intra-ensaio do produto foi calculada com 20 determinações
consecutivas, utilizando 2 amostras de sangue com valores de HbA1C de 39 e
77 mmol/mol. As médias dos coeficientes de variação obtidos foram de 1,2 e 1,0
%, respectivamente.
Reprodutibilidade (Variação Inter-Ensaio)
A reprodutibilidade inter-ensaio do produto foi calculada com 25 determinações,
utilizando 2 amostras de sangue com valores de HbA1C de 39 e 77 mmol/mol.
As médias dos coeficientes de variação obtidos foram de 3,7 e 2,5 %,
respectivamente.
Limite de Detecção
Para HbA1C = 0,06 mmol/L. O intervalo de medida vai de 0,0 6 até 1,61 mmol/L.
Para Hb Total = 0,48 mmol/L. O intervalo de medida vai de 0,48 até 24,8 mmol/L.
Interferências
A lipemia (triglicérides até 600 mg/dL), bilirrubina até 60 mg/dL e fatores
reumatóides até 750 UI/mL não interferem nos resultados.
Para os anticorpos anti-HbA1C utilizados não foram encontradas reações
cruzadas com HbAo, HbA1a, HbA1b, hemoglobina acetilada, hemoglobina
carbamilada, albumina glicada, HbA1C lábil e Hba1d.
As variantes de hemoglobina HbS e HbC não interferem.
Concentrações muito elevadas de HbF podem originar valores de HbA1C
inferiores aos esperados.
Pacientes com anemia hemolítica, anemia por deficiência de ferro ou após uma
transfusão apresentam eritrócitos com meia vida alterada. Nesses casos, os
resultados de HbA1C devem ser interpretados com cuidado.
Comparação de Métodos
O produto HbA1C - Turbidimetria foi comparado com os métodos de referência
da IFCC e do NGSP. Os resultados analisados por modelos estatísticos
demonstram que não há diferença significativa entre os métodos em um
intervalo de confiança de 95%.
OBSERVAÇÕES
1- As vidrarias requerem uma limpeza com detergente neutro ou uma solução
ácida. A última lavagem deve ser feita com água destilada ou deionizada.
2- A observação minuciosa da pipetagem, da estabilidade dos reagentes e da
limpeza da vidraria é de extrema importância para se obter resultados exatos e
precisos.
3- A água utilizada nos laboratórios clínicos deve ser purificada utilizando-se
métodos adequados para as finalidades de uso.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. American Diabetes Association. Diabetes Care 2004; 27(suppl 1):S5-S10.
2. DCCT Research Group. Diabetes Control and Complications Trial (DCCT).
N Engl J Med. 1993; 329:977-986.
3. UK Prospective Diabetes Study Group (UKPDSG): Lancet 1998; 352:837-853.
4. POSICIONAMENTO OFICIAL 2004 - Grupo Interdisciplinar de Padronização
da Hemoglobina Glicada A1c. A importância da hemoglobina glicada (A1c) para
a avaliação do controle glicêmico em pacientes com diabetes mellitus: aspectos
clínicos e laboratoriais. Disponível em: http://www.sbpc.org.br.
5. Karl J et al. Development and standartization of a new immunoturbidimetric
HbA1C assay. Klin Lab 1993;39:991-996.
6. Jeppson JO et al. Approved IFCC reference method for the measurement of
HbA1C in human blood. Clin Chem Lab Med 2002;40:78-89.
7. GOLD ANALISA: Informe Técnico do Produto.
APRESENTAÇÃO
Cat.
405
Embalagem
Normal
Reagentes
Volume
1- Hemolisante
2 x 95 mL
2- Tampão
1 x 40 mL
3- Anticorpo
1 x 40 mL
4- Aglutinante
1 x 10 mL
5- Padrão
1 x 2 mL
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Lei nº 8.078 de 11-9-90 - Código de Defesa do Consumidor
A Gold Analisa garante a substituição, sem ônus para o consumidor, de todos os
produtos que comprovadamente apresentarem problemas técnicos, desde que
o usuário utilize equipamentos e materiais em boas condições técnicas, siga
rigorosamente o procedimento técnico e as recomendações estabelecidas nas
Instruções de Uso.
Nº do lote e data de validade: Vide rótulos do produto
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Edição: 08/12