Vice-Reitoria para Assuntos Acadêmicos - SOL

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UNIVERSIDADE CATÓLICA DE GOIÁS
Vice-Reitoria para Assuntos Acadêmicos
Departamento de Biologia
Coloração de Gram
Material
corante cristal violeta
corante fucsina básica
solução de iodo (lugol)
etanol-acetona (1:1 v:v)
bico de Bünsen
alça bacteriológica
lâmina de microscopia
microscópio óptico
Procedimento
1. Preparo do esfregaço
Suspender uma pequena porção da amostra bacteriana a ser corada em uma gota de água ou
solução salina 0,85%, sobre uma lâmina de microscópio, espalhando a gota. Este
procedimento deve ser feito com um alça bacteriológica flambada ou um palito esterilizado.
Deixar o material secar e, em seguida, fixá-lo com calor, aquecendo rapidamente a lâmina
acima da chama de um bico de Bünsen.
2. Aplicação do corante primário
Despejar o corante cristal violeta sobre a lâmina cobrindo toda a amostra; deixar em repouso
por um minuto.
Enxaguar a lâmina com água para remover o excesso de corante.
3. Aplicação do fixador
Despejar lugol sobre a lâmina cobrindo toda a amostra; deixar em repouso por 30 segundos;
enxaguar a lâmina com água para remoção do excesso do fixador.
4. Descoloração
Com a lâmina inclinada, despejar algumas gotas de álcool-acetona (1:1 v:v) para remover o
complexo cristal violeta-lugol; enxaguar a lâmina com água para remover excesso de solvente.
5. Aplicação do corante secundário
Despejar o corante fucsina básica sobre a lâmina cobrindo toda a amostra; deixar em repouso
por 30 segundos.
Enxaguar a lâmina com água e secar com papel absorvente.
6. Microscopia
Examinar a amostra ao microscópio óptico.
Composição dos corantes
Solução de cristal violeta
Solução A
cristal violeta
etanol:acetona
2,0 g
20 ml
Solução B
Solução de lugol
iodo
iodeto de
potássio
água destilada
1,0 g
2,0 g
Solução de fucsina
fucsina
água destilada
1,0 g
100 ml
100 ml
oxalato de
0,8 g
amônia
água destilada
100 ml
Misturar as soluções A e B e
deixar em repouso por 24 horas
antes do uso.
Fontes William R. Mayberry WR, Quillen JH & Catlin K. Gram stain tutorial. MicrobeLibrery: disponível e, <http://www.microbelibrary.org> acesso em 20 de fevereiro de 2006
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Coloração de Gram
Método de coloração de Gram
Esta técnica foi desenvolvida em 1884 pelo médico dinamarquês Hans
Christian Joachim Gram (1853-1938) e serve para a visualização e
diferenciação de bactérias.
Parede Celular (PC)

Sinônimos: saco murâmico, peptoglicano, mureína, mucocomplexo,
mucopeptídeo, peptideoglicano.

Características: rígida, inelástica, porém deformável.

Funções:
- Dá forma à célula;
- Promove resistência a choques mecânicos e osmóticos;
- Serve de sítio de absorção de vírus;
- Determinante da especificidade antigênica;
- Responsável pela divisão das bactérias em Gram + e Gran -.
Fontes William R. Mayberry WR, Quillen JH & Catlin K. Gram stain tutorial. MicrobeLibrery: disponível e, <http://www.microbelibrary.org> acesso em 20 de
fevereiro de 2006
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Coloração de Gram

Composição: polimérica, com sub-unidades de ácido murâmico, N-acetil glicosamina
(NAGL) e tetrapeptídeo.

Antibióticos impedem a formação da parede celular por atuarem na síntese protéica.
No espaço periplasmático da PC há enzimas  -lactamases que inativam antibióticos
como penicilina e cefalosporina, por hidrolisar o anel  -lactâmico.

Lisosima faz digestão da PC e está presente em saliva, muco e lágrima. Atua
destruindo a ligação NAGl - Mureína.
Bactérias Gram-positivas: sua parede celular é composta por uma espessa camada de
peptideoglicanos (proteínas + carboidratos). Algumas também possuem uma camada de
Ácido Teicóico externa à camada de peptideoglicanos. O Lugol (iodo) utilizado no
método de coloração de Gram fixa a violeta genciana a este tipo de parede celular.
Bactérias Gram-negativas: possuem parede celular composta por lipopolissacarídeos,
lipopoliproteínas e fosfolipídeos. Estas bactérias não retém a violeta genciana no
método de coloração de Gram.
Característica
Gram +
Gram -
Composição
Entre 2 ácidos murâmicos da
PC há um tetrapeptídeo. Um
ácido teicóico está presente.
Entre 2 ácidos murâmicos da PC há um tetrapeptídeo
Espessura
 20nm
 10nm
Amino ácidos
Pouco
Muito
Lipídeos
 2%
 20%
Peptoglicano
 90% (muitas camadas)
 5-10% (1-2 camadas)
Polissacarídeo
Pouco
Muito
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