Morfologia de bactérias de Yorgurt natural, Yakult

Morfologia de bactérias de Yorgurt natural, Yakult, mucosa bucal, Klebsiella
sp., E. coli e Estreptococos sp. pelo método de coloração Gram.
INTRODUÇÃO
Uma população microbiana, sob condições naturais, contêm muitas espécies
diferentes, não somente espécies de bactérias, mas também espécies de leveduras,
bolores, algas e protozoários. Por esta razão é necessários que se possa identificar
quantos e quais tipos de microorganismos estão presentes em um ambiente em
particular. Os microbiologistas devem ser capazes de isolar, enumerar e identificar os
microorganismos em uma amostra.
Para que se possa caracterizar os microorganismos existem inúmeras técnicas
laboratoriais. Através da aplicação dessas técnicas foi possível dispor de muitas
informações que são utilizadas para caracterizar espécies bacterianas.
As
informações comumente obtidas por meio dessas muitas técnicas são a respeito de
características morfológicas. Tais informações são extremamente importantes para
que se possa distinguir diferentes tipos de bactérias e outros microorganismos.
Tamanho, forma e arranjo das células podem ser determinadas por meio de
vários tipos de microscópios e com diferentes métodos de coloração, tanto estruturas
celulares internas quanto a célula inteira podem ser estudadas.
Dentre as técnicas usadas para se obter a caracterização dos
microorganismos, citam-se: o preparo adequado do esfregaço (camada fina do
espécime sobre uma lâmina de vidro), a fixação do material da lâmina pelo calor e a
coloração do material na lâmina. A coloração é um procedimento importante para que
seja possível fazer o exame microscópico, visto que as bactérias geralmente são
transparentes.
Segundo Pelczar, Chan & Krieg (1997) a coloração aplicada ao material
biológico pode ser do tipo simples, diferencial ou de Gram, e a utilização de um desses
tipos de coloração deve estar de acordo com os objetivos estabelecidos inicialmente.
A coloração de bactérias ou outros microorganismos, com uma única solução
de corante é denominado coloração simples. As células usualmente coram-se
uniformemente com esta técnica.
Na coloração diferencial diferenças entre as células microbianas ou partes
das células podem ser vistas. Nelas mais de uma solução corante é utilizada. Um
exemplo desse tipo de coloração diferencial é a coloração de álcool-ácido resistência
ou conhecida também como coloração de Ziehl-Neelsen. Essa técnica é usada, por
exemplo, na detecção de bactérias que causam a tuberculose.
A coloração de Gram é uma das mais importantes e mais utilizadas técnicas de
coloração diferencial para bactérias. De acordo com tal técnica as bactérias são
classificadas em dois grupos: as bactérias Gram-positivas e as bactérias Gramnegativas.
A identificação de diferentes microorganismos é extremamente importante
no diagnóstico e o tratamento de doenças, a produção de vinhos e derivados do leite e
o tratamento de esgotos são apenas alguns exemplos diários em que algum
microorganismos são necessários e outros não. Conhecer qual microorganismo está
presente é a primeira etapa da análise microbiológica.
OBJETIVOS
Através da realização desse experimento temos como objetivo:
- identificar a morfologia bacteriana de Estreptocos sp, Estafilococos sp, E.
coli e Kebsiella sp;
- determinar a flora bacteriana presente no yogurt, yakult e mucosa bucal.
- Observar o tamanho, a forma e o arranjo das bactérias nas diferentes
lâminas.
METODOLOGIA
Após retiradas da solução de álcool-éter e secas em papel absorvente, as lâminas
forma presas na pinça de madeira e flambadas lentamente na chama do bico de
Bunsen. O procedimento descrito a seguir foi igual para a cultura em meio líquido
(culturas de: Estreptococos sp., Estafilococos sp., E. coli e Klebsiella sp. ), Yogurt e
Yakult.
Com o auxílio da alça bacteriológica previamente flambada, uma gota de material
biológico foi colocada no centro da lâmina (já etiquetada) e nela espalhada com
movimentos circulares, do centro para a periferia, de moda a obter um esfregaço
homogêneo. Após secas, as lâminas foram fixadas através do uso do calor, cortando a
chama de três a quatro vezes, com o material na face superior da lâmina.
Nos casos do Yakult e do Yogurt, antes de colocarmos estes materiais na lâmina, foi
acrescentada uma ou duas gotas de solução fisiológica, a fim de diluí-los.
Na preparação do esfregaço de mucosa bucal, foi utilizada uma espátula de madeira
estéril para a retirada do material (células epiteliais da mucosa). Este material foi
espalhado sobre a lâmina até a obtenção de uma camada fina. A lâmina também foi
deixada para secar em campo estéril e fixada no calor. Uma vez secas e fixadas,
todas as lâminas forma submetidas à bateria de Gram (coloração).
BATERIA DE GRAM
As sete lâminas foram apoiadas no suporte de coloração instalado sobre a pia. Sobre
todas as lâminas foi colocada solução de violeta genciana fenicada, e aguardou-se um
minuto. Em seguida, foram rapidamente lavadas em água corrente e novamente
cobertas por corante, desta vez lugol, por mais um minuto. Após retirado o excesso de
lugol em água corrente, foi colocado aproximadamente dez gotas de álcool em cada
lâmina, estas estando na posição inclinada, até que o álcool que escorria voltasse a sua
coloração normal. Por fim, as lâminas foram cobertas com fucsina fenicada por um
minuto e lavadas em água corrente.