Dra. Adele Caterino – Debate FINAL

A necessidade de produção de um kit
nacional para distribuição na rede
pública de saúde
Profª Drª Adele Caterino-de-Araujo
Instituto Adolfo Lutz de São Paulo
Ensaios sorológicos – HTLV-1/2
Triagem
 EIA (Murex HTLV-I+II, Abbott; Biolisa HTLV-I+II 5.0, Biokit; Gold Elisa HTKLV-I+II, REM)
 CMIA (Archtect rHTLV-I/II, Abbott)
Confirmatórios
 WB 2.4 (Abbott)
 INNOLIA (Innogenetics)
 PCR (in house)
Seminário Estadual em
HTLV
Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012
Ensaios sorológicos – HTLV-1/2
EIA de 3a geração – disponíveis no mercado nacional
(custo: até R$ 5,00 por orifício)
 Murex  HTLV-I + II, Abbott
Peptídeos sintéticos env gp46 HTLV-I e HTLV-II+ rgp21 HTLV-II,
conjugado os mesmos Ags env* + rgp21 HTLV-I* peroxidase,
TMB, 450 nm. Detecta IgG, IgM e IgA
 BioELISA HTLV-1+2 5.0, Biokit
Três proteínas recombinantes de HTLV-1 e HTLV-2, conj. uma proteína
de fusão tripla*peroxidase, OPD, 492nm. Detecta IgG, IgM e IgA
 Gold Elisa HTLV-1/2, REM
Antígenos recombinantes HTLV-1 e HTLV-2, conj. mesmos Ags*
peroxidase, OPD, 492nm. Detecta IgG, IgM e IgA
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Ensaios sorológicos – HTLV-1/2
ARCHITECT rHTLV I/II, Abbott
Sistema Automatizado
Partículas magnéticas cobertas com rgp21 (HTLV-I e HTLV-II) e
peptídeos sintéticos de gp46 (HTLV-I) e gp46 (HTLV-II).
Detecta anticorpos IgM e IgG
Resultados Preliminares em Bancos de Sangue:
N = 32.660
EIA Ortho = 0,08%
CMIA Abbott = 0,34%
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Proteínas externas de envelope de HTLV-1 e
HTLV-2 (gp46) e transmembrana (gp21)
MTA-1 aa162-209
K55 aa162-205
p21e aa397-430
Id epitopes aa188-193
Id epitopes aa183-199
GD21 aa361-404
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Ensaio de Western blot
Ensaio confirmatório e discriminatório
HTLV Blot 2.4
Lisado HTLV-I+rgp46-I(MTA-1)+rgp46-II(K55) +
GD21
Diagnostic Biotechnology, DBL, 1995
Subsequentemente Genelabs e Abbott
(custo: até R$ 250,00 por tira)
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Indeterminado c
Indeterminado b
Indeterminado a
HTLV
HTLV-1 e HTLV-2
HTLV-2
10
CS
rgp46-I
rgp46-II
HTLV-1
Negativo
Ensaio de Western blot 2.4
p53
p36
p32
p28
p26
p24
gp21
p19
GD21
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Ensaio imunocromatográfico – HTLV-1/2
(custo: até R$ 250,00 por tira)
INNO-LIA HTLV-I/II assay, Innogenetics
Tiras de nylon cobertas com proteínas recombinantes rp19, rp24, rgp21
(HTLV-I e HTLV-II) + peptídeos sintéticos gp46-I (HTLV-I), gp46-II (HTLVII) e p19-I (HTLV-I)
Resultados de acordo com a intensidade das bandas:
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Ensaio imunocromatográfico – HTLV-1/2
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Ensaio imunocromatográfico – HTLV-1/2
INNO-LIA COMO TESTE CONFIRMATÓRIO PARA
INFECÇÃO PELOS VÍRUS HTLV-1/2, UMA BOA ESCOLHA?
Danielly Paula Alvarenga Silva
TC-PAP
Orientador: Elizabeth de los Santos Fortuna
Disposição das bandas do ensaio INNO-LIA ™ HTLV I/II
LiRAS® (Line Reader & Analysis Software)
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Ensaio imunocromatográfico – HTLV-1/2
48% positivas
28% Ind.
24% negativas
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Ensaios moleculares – HTLV-1/2
Reação em cadeia da polimerase (PCR)
Ensaios de PCR e hibridização ou nested-PCR
PCR para segmentos conservados
tax ou pol
O uso de primers específicos para HTLV-1 e HTLV-2 permite discriminar o vírus
O uso de primers comuns para HTLV-1 e HTLV-2 necessita de análise por RFLP
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Ensaios moleculares – HTLV-1/2
PCR - Restriction fragmewnt lenght polymorphism analysis
Região tax
enzima: Taq I
HTLV-1 –
HTLV-2 +
RFLP tax HTLV-1 e -2
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HTLV-I
HTLV-2
(custo: até R$ 35,00)
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Ensaios moleculares – HTLV-1/2
PCR em tempo real
(pol ou tax)
Threshol
d
TaqMan
SYBER Green
(custo: até R$ 45,00)
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O que precisamos fazer?
 Comparar a sensibilidade e especificidade, valor preditivo positivo e negativo
de testes de diagnóstico laboratorial disponíveis no mercado nacional (ELISA,
Western Blot e INNOLIA)
 Padronizar a PCR e nested-PCR para o diagnóstico confirmatório
 Padronizar a detecção da carga proviral (PCR em tempo real): região tax ou
pol e sistema TaqMan ou SyberGreen
 Sequenciar e caracterizar os HTLV-1 e HTLV-2 que circulam no Brasil e
desenvolver um kit contendo proteínas recombinantes e/ou peptídeos sintéticos
(gp46, gp21, p19, p24) que representem melhor esses isolados
 Produzir um kit para o diagnóstico confirmatório usando os conhecimentos
obtidos.
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Lembrar!

Das particularidades de cada região geográfica
 Da infra-estrutura laboratorial
 Das populações a serem avaliadas
 Do custo / benefício de cada teste
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