Brucella abortus é uma bactéria Gram

Brucella abortus é uma bactéria Gram-negativa, que causa uma doença crônica em bovinos, humanos e
outras espécies denominada brucelose. IFN-? é crucial para o controle da B. abortus enquanto a IL-10 é
conhecida por diminuir a produção desta citocina in vitro interferindo diretamente no processo da
eliminação do patógeno. Associado ao papel da IL-10, estudos recentes têm demonstrado que os
miRNAs atuam na regulação pós-transcricional da expressão das citocinas pró-inflamatórias.
Estimulados pelo interesse em analisar o papel do controle da resposta imune inflamatória, o objetivo
deste estudo foi avaliar o papel da IL-10 endógena e dos miRNAs durante a infecção pela B. abortus. No
estudo do papel da IL-10, camundongos IL-10 KO ou 129 Sv/Ev foram infectados com a cepa S2308 de B.
abortus e em todas as semanas analisadas, camundongos IL-10 KO apresentaram menor número de
bactérias recuperadas no baço, em relação ao grupo controle, evidenciando-se a completa eliminação
da bactéria com 14 semanas após a infecção. Ademais, foi observado um aumento da produção de IFN?, TNF-? e IL-17 em soro e em cultura dos esplenócitos, e elevados níveis de IL-12 e TNF-? em BMDCs
dos animais IL-10 KO quando infectados pela B. abortus. Granulomas multifocais e necrose do tecido
hepático dos animais infectados foram observados em análises histopatológicas, contudo, houve uma
grande redução no número de granulomas nos animais IL-10 KO. Esta redução na patologia hepática foi
acompanhada do aumento no número de células Tregs e do aumento da expressão de TGF-? em cultura
de esplenócitos dos animais IL-10 KO. Juntamente, os resultados demonstraram que a IL-10 modula a
resposta imune pró-inflamatória contra B. abortus e a ausência desta citocina aumenta a resistência à
infecção por esta bactéria. A fim de estudar o papel dos miRNAs nesta infecção, amostras deRNA total
de BMDMs não infectados ou infectados foram sequenciados restringindo-se à análise de pequenos
RNAs. Os resultados do RNAseq demonstraram que 81% das reads foram mapeadas em genes
codificadores de miRNAs. Setecentos e quarenta e cinco miRNAs foram identificados em ambas
bibliotecas, onde 18 miRNAs apresentaram-se diferencialmente expressos. Destes, 7 miRNAs foram
validados com aumento de expressão e 5 miRNAs com diminuição de expressão. Dos miRNAs validados,
foi observada a dependência da molécula MyD88 para o aumento da expressão do mmu-miR-181a-5p e
do mmu-miR-99a-5p. O mmu-miR-328-3p apresentou diferenças na expressão quando comparados ao
animal C57BL/6 na ausência de STING, mas não em células de MyD88 KO. Os mmu-miR-21a-5p, mmumiR-98-5p e mmu-miR-146b-5p demostraram que a molécula MyD88 tem um importante papel na
manutenção da diminuição da expressão destes miRNAs. Para a molécula STING o mmu-miR-146b-5p
apresentou uma diminuição de expressão ainda maior quando comparada ao animal selvagem. Dentre
os miRNAs diferencialmente expressos os mmu-miR-181a-5p e mmu-miR-21a-5p foram selecionados
para as análises seguintes. Análises in silico identificaram 730 putativos alvos para mmu-miR-181a-5p e
328 alvos para mmu-miR-21a-5p. Análises de enriquecimento das vias biológicas destes putativos alvos,
indicaram 19 e 13 vias biológicas para os mmu-miR-181a-5p e mmu-miR-21a-5p, respectivamente. Para
as análises biológicas destes miRNAs BMDMs foram transfectados com mimic ou inhibitors específicos
resultando no aumento ou na diminuição da quantidade dos miRNAs nas células. A expressão dos genes
codificadores de TNF-? ou IL-10 foram analisados em células transfectadas e infectadas pela B. abortus
demonstrando o efeito dos mmu-miR-181a-5p e mmu-miR-21a-5p, respectivamente, no controle da
expressão destas importantes citocinas. Até o presente momento, os resultados indicam um perfil de
miRNAs diferencialmente expressos durante a infecção pela B. abortus e estudos futuros irão esclarecer
o papel destes miRNAs na regulação da resposta imune durante a infecção pela B. abortus.