Detecção de número de cópias do cromossomo X por PCR em

56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Detecção de número de cópias do cromossomo X por PCR
em tempo real em pacientes com síndrome de Turner
Gennaro, FGO1; Araújo, A1; Machado, ML1; Laureano, LAF2; Galerani, MAV1; Ramos, ES1
Departamento de Genética, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto-USP.
Setor de Genética Médica do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto.
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Palavras-chave: síndrome de Turner, mosaicismo, isocromossomo, gene AR, qPCR.
A síndrome de Turner (ST) está associada à perda total ou parcial do cromossomo X. Além do cariótipo 45,X
“puro”, as pacientes podem apresentar mosaicismo com diferente proporções de linhagens celulares. O diagnóstico
laboratorial é tradicionalmente realizado por análise citogenética, mas técnicas de biologia molecular têm sido
utilizadas principalmente como análise complementar. Recentemente, a reação em cadeia da polimerase (PCR)
em tempo real (PCR quantitaiva ou qPCR) foi empregada para quantificação do número de cópias do cromossomo
X. Verificar a viabilidade da utilização da qPCR para a detecção de mosaicismo cromossômico em pacientes com
ST. Foram selecionados 10 pacientes com a ST que apresentavam mosaicismo com duas linhagens celulares [X/
XX, ou X/r(X) ou X/X,i(X)(q10)] em proporções diferentes, duas pacientes com cariótipo 46,X,i(X)(q10)[100] e 23
indivíduos normais da população, 12 homens (XY) e 11 mulheres (XX). O DNA, extraído a partir de amostras de
sangue periférico, foi analisado quanto à presença do cromossomo Y (gene TSPY) por PCR convencional como
critério de exclusão, no caso das pacientes. A técnica de qPCR foi utilizada para análise de sequência do éxon 5 do
gene do Receptor de Andrógenos (AR), localizado na região Xq11.12, a qual se apresenta na forma de uma cópia
nos indivíduos XY e duas nos XX, e do GAPDH, gene endógeno e controle da reação. A localização em uma região
importante do cromossomo X, entre o centro de inativação e o centrômero, faz com que o gene AR esteja presente na
maioria dos casos de alterações estruturais do cromossomo X que possuem o centro de inativação, sendo útil para a
detecção de mosaicismos crípticos e quantificação do cromossomo X. No caso das pacientes com ST que apresentam
mosaicismo sem o isocromossomo a quantificação mostrou resultados que variavam entre os valores obtidos para
homens e mulheres normais, de acordo com a porcentagem de células 45,X. Nas pacientes com isocromossomo,
mosaicos ou não, os resultados variaram de valores de um homem normal até o de pacientes 47,XXX. A técnica foi
sensível na detecção de mosaicismo quando para pacientes com maiores proporções de células 45,X No caso das
pacientes com isocromossomo de X existe a necessidade de associação de marcadores também de Xp para que a
análise seja conclusiva. A qPCR mostrou-se uma ferramenta complementar para o estudo das pacientes com ST.
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