Trabalho

PRODUÇÃO DE AMILASE POR BACTÉRIAS
DO SOLO E ASSOCIADAS A PLANTAS DE
COUVE–FLOR
Maria das Dores da Silva1, Júlia Kuklinsky-Sobral2, César Auguste Badji2, Fernando José Freire3,
Michelangelo de Oliveira Silva4, Andreza Raquel Barbosa de Farias5, Luana Lira Cadete5 & Eraldo Gallese
Honorato Viana5

Introdução
Material e métodos
Enzimas são proteínas vitais que catalisam reações
bioquímicas com grande especificidade, sendo capazes
de aumentar centenas de vezes algumas reações, sem
requerer condições extremas de pH, pressão e
temperatura. Além disso, proteínas proporcionam
enormes oportunidades às indústrias, pois efetuam
conversões biocatalíticas finas, eficientes e econômicas
[1].
A. Linhagens bacterianas
Apesar das enzimas ocorrerem amplamente em
plantas e animais, as de origem microbiana representam
melhores fontes devido à sua ampla diversidade
bioquímica e susceptibilidade à manipulação genética
[2]. Depois dos antibióticos, elas são os produtos mais
explorados pela indústria biotecnológica. Cada vez
mais, está crescendo o número de pesquisas que visem
selecionar novas fontes microbianas para a produção de
enzimas.
Amilases estão entre as classes mais importantes das
enzimas e são de grande interesse na biotecnologia
atual, devido à sua ampla aplicação em vários campos,
incluindo a química clínica, produção de
medicamentos, industria têxtil, produção de papel,
indústria de alimentos, liquefação do amido e produção
de açúcar [3]. Assim, novas pesquisas, visando
identificar novas linhagens de microorganismos para
produção de amilases, são de grande interesse.
Portanto, o presente trabalho teve o objetivo de
selecionar bactérias do solo e associadas à couve-flor
(Brassica oleraceae) que apresentem capacidade de
produzir amilase.
Foram avaliadas 23 linhagens bacterianas do solo e 15
da rizosfera, isoladas de amostras de área cultivada com
plantas de couve-flor, na Propriedade Rural Açude Novo,
localizada no município de Garanhuns, PE. As linhagens
pertencem à coleção de culturas bacterianas do Laboratório
de Genética e Biotecnologia Microbiana (LGBM) da
Unidade Acadêmica de Garanhuns (UAG/UFRPE).
B. Teste de produção da amilase
A seleção de bactérias produtoras de amilase foi
realizada segundo Mariano e Silveira [4], com algumas
modificações. As bactérias foram inoculadas em placas de
Petri com meio TSA 10% (Tripcase Soy Agar) acrescido
com 1% de amido de milho. As placas foram incubadas a
28°C por 72h e, em seguida, realizadas as leituras. Para
tanto, foram adicionados 5ml de solução de Iodo (1%) e
mantido por 20 min, em seguida, a solução foi descartada e
observado a presença de um halo claro em torno da
colônia, indicando secreção de amilase.
Os experimentos foram realizados em triplicata e para
aquelas linhagens que apresentaram halo visível, a
atividade amilolítica das linhagens foi estimada mediante
um índice enzimático (IE), que expressa a relação do
diâmetro médio do halo de hidrólise e o diâmetro médio da
colônia.
Resultados e discussão
Enzimas são os produtos microbianos mais explorados
na indústria biotecnológica, visto que apresentam menor
custo, maior facilidade para produção e maior
susceptibilidade de manipulação genética em relação a
produtos similares de origem vegetal ou animal.
Neste contexto, 38 linhagens bacterianas associadas à
couve-flor foram avaliadas quanto à capacidade de
________________
1. Aluna de Graduação em Zootecnia da Unidade Acadêmica de Garanhuns, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Av. Bom Pastor, s/n, Boa
Vista, Garanhuns, PE, CEP 55296-901. [email protected]
2. Professores Adjuntos da Unidade Acadêmica de Garanhuns, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Av. Bom Pastor, s/n, Boa Vista,
Garanhuns, PE, CEP 55296-901.
3. Professor Adjunto do Departamento de Agronomia, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Rua Dom Manuel de Medeiros, Dois Irmãos,
Recife, PE, CEP 52171-900.
4. Doutorando do PPG em Ciência do Solo, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Rua Dom Manoel de Medeiros, s/n, Dois Irmãos, Recife,
PE, CEP 52171-900.
5. Alunos de Graduação em Agronomia da Unidade Acadêmica de Garanhuns, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Av. Bom Pastor, s/n,
Boa Vista, Garanhuns, PE, CEP 55296-901.
Apoio financeiro: CNPq e FACEPE.
produzir amilase in vitro. Foi observado que 16% das
bactérias avaliadas foram capazes de secretar a enzima
amilase, sendo todas as linhagens estas oriundas do
solo. Enquanto que todas as linhagens da rizosfera
foram negativas para o teste realizado.
Foi observado também o índice de atividade
enzimática (IE), sendo este um dos parâmetros mais
usados para avaliação da capacidade de produção de
enzimas por microrganismos em meio sólido. Para ser
considerado um bom produtor de enzimas
extracelulares, a literatura indica um IE maior ou igual
a 2,0 [4, 5]. Neste caso, todas as linhagens positivas
apresentaram boa capacidade de produção enzimática,
visto que, todas apresentaram IE maior que 2,0.
Portanto, os resultados deste trabalho demonstraram
que o solo de área cultivada com plantas de couve-flor
pode ser uma fonte rica de bactérias produtoras de
amilase com bons índices enzimáticos.
Referências
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