Extração de proteínas e eletroforese bidimensional de castanhas de

56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Extração de proteínas e eletroforese bidimensional de
castanhas de caju (Anacardium occidentale L.) para
análise proteômica
Alves Filho, JG1,3; Soares, maa2; Moreira, CG2; Moreira, RF2; Cunha, RMS1,3.; Cavada, BS1,4
Laboratório de Genética Molecular - Núcleo de Biotecnologia de Sobral
Universidade Estadual Vale do Acaraú
3
Universidade Federal do Ceará
4
Laboratório de Moléculas Biologicamente Ativas
1
2
Palavras-chave: cajueiro, eletroforese bidimensional, proteômica, proteínas de reserva, castanha do caju.
O cajueiro (Anacardium occidentale L.) é uma espécie nativa do Brasil de grande importância no setor
agroindustrial, especialmente para os estados do Ceará, Piauí e Rio Grande do Norte. Entre os subprodutos do
cajueiro de importância econômica destacam-se o pedúnculo, a amêndoa e o líquido da castanha do caju. As
amêndoas da castanha do caju contem proteínas de alta qualidade nutricional, e é considerada uma fonte de
proteínas de baixo custo. Apesar da grande importância econômica, poucos estudos têm sido feitos no sentido
de caracterizar as proteínas da amêndoa da castanha de caju, restringindo-se mais a caracterização de alérgenos.
Na atual era pós-genômica, estudos envolvendo proteômica permitem a identificação de centenas de proteínas
em um curto espaço de tempo graças ao auxílio das técnicas de eletroforese bidimensional e espectrometria de
massa. Tal abordagem pode auxiliar na identificação de um grande número de proteínas de reserva permitindo
a identificação de marcadores moleculares e a elucidação de vias metabólicas. O presente trabalho tem como
objetivo a obtenção de proteínas de sementes de cajueiro de qualidade para análise em géis bidimensionais.
As proteínas totais foram extraídas a partir da farinha da semente delipidada e liofilizada (20mg) acrescido de
PVPP e tampão piridina-SDS na proporção de 1:2:40. As proteínas foram ressuspensas em 100µL de uréia/tiouréia
9M, quantificadas pelo método de Bradford e analisadas em SDS-PAGE para verificação da integridade. Para a
focalização isoelétrica, usou-se 250 µg de proteína total em tiras IPG de 11 cm (pH 4-7) e 13 cm (pH 3-10) utilizando
o equipamento IPGphor III. A segunda dimensão foi realizada em géis de poliacrilamida a 15% no sistema Hoefer
SE 600 Ruby™. Os géis foram corados com PhastGel™ Blue-R e descorados com ácido acético 10% e metanol 40%.
As imagens dos géis 2D foram captadas em ImageScannerIII, editada e analisada pelo software ImageMaster 2D
Platinum 6.0. Os spots foram identificados utilizando a ferramenta TagIdent do Expasy (www.expasy.ch/). A
concentração das proteínas totais das amêndoas do cajueiro comum foi de 30 µg/L. A SDS-PAGE mostrou
bandas íntegras e livres de degradação. As proteínas totais de cajueiro gigante foram submetidas à eletroforese
bidimensional permitindo a visualização de mais de 200 spots com qualidade. Os spots mais intensos foram
analisados no TagIdent com base nos seus valores de massa e ponto isoelétrico permitindo a identificação de várias
proteínas de reserva. Muitos dos spots abundantes no gel não foram encontrados no banco de dados. Atualmente
estamos selecionando os spots mais abundantes com intuito de seqüenciar as proteínas por espectrometria de
massa. Este é o primeiro trabalho envolvendo caracterização de proteínas utilizando abordagem proteômica.
Apoio: Funcap