RESUMO Peptídeos potenciadores de bradicinina

RESUMO
Peptídeos potenciadores de bradicinina (PPB) podem ser encontrados em
diferentes fontes animais, e, do ponto de vista estrutural, estes peptídeos
apresentam uma assinatura contendo um resíduo de ácido piroglutâmico no Nterminal e dois resíduos de prolina na porção C-terminal. O peptídeo TsHpt-I foi
previamente isolado da peçonha do escorpião amarelo Tityus serrulatus e
descrito como um PPB. Embora apresente o motivo estrutural Pro-Pro, este
peptídeo não inibe a enzima conversora de angiotensina (ECA), como descrito
para outros PPBs conhecidos, além de ser capaz tanto de potenciar a
bradicinina quanto induzir uma rápida e transiente hipotensão in vivo em ratos
normotensos.
Para avaliar a possível participação de receptores de bradicinina na hipotensão
mediada pelo TsHpt-I, células CHO transfectadas com os receptores de
bradicinina e marcadas com DAF foram observadas por microscopia confocal
perante o estímulo com TsHpt-I. Foi possível observar um aumento na
fluorescência induzida pela produção de óxido nítrico em células estimuladas
com BK (controle) e TsHpt-I. Análises de western blotting em células CHO-B2
mostraram a fosforilação da Ser1177, o resíduo excitatório da eNOS, na
presença de BK e TsHpt-I, corroborando os resultados obtidos pela
microscopia confocal.
Em ensaio semelhante ao utilizado em células CHO-B2, a liberação de óxido
nítrico foi avaliada em cardiomiócitos, que expressam constitutivamente os
receptores de cininas. Nestas células, o peptídeo TsHpt-I, assim como a
bradicinina, também induziram a liberação de NO, sendo este efeito abolido por
HOE 140, um antagonista de B2R. Um análogo sintético estruturalmente
minimizado, de apenas três aminoácidos (KPP), foi capaz de manter a
atividade observada para o peptídeo integro. A acetilação da cadeia lateral da
lisina (acKPP), aboliu a liberação de oxido nítrico, sugerindo que a carga
positiva deste aminoácido seja essencial para o efeito agonista dos peptídeos
no receptor. Ao estimular os cardiomiocitos com o análogo KPP na presença
de HOE 140, a fluorescência também foi abolida, assim como observado para
TsHpt-I. Em cardiomiocitos de animais duplo knockout para B1/B2, não houve
liberação de NO nas presenças de BK, TsHpt-I e KPP. Neste experimento,
somente o grupo controle positivo (Ang(1-7)) aumentou a fluorescência.
Os resultados sugerem a ativação direta de B2R como o modo de ação
primário de TsHpt-I, sendo que o peptídeo análogo, de apenas três
aminoácidos, é capaz de manter este efeito. Foi ainda observado que a carga
positiva da cadeia lateral da lisina é essencial para esta atividade.