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ESTUDO COMPARATIVO DO EFEITO ANSIOLÍTICO DA Erythrina verna
(MULUNGU) E O CLONAZEPAM (RIVOTRIL) EM MODELO ANIMAL DE
ANSIEDADE
WILSON FELIPE PEREIRA1 MARCELO QUIRINO DE MOURA MACHADO2
RESUMO
Foi investigado o efeito da administração intraperitoneal (i.p) aguda do extrato
hidroalcoólico de Erythrina verna (EV, leguminosae, Papilionaceae) e de Clonazepam em
camundongos swiss machos submetidos aos testes open field e caixa claro-escuro, comparados
de acordo com os percentis 5, 10, 20 e 50 em relação às respectivas doses letais dos dois grupos.
Nestes modelos foram analisados comportamentos como atividade de locomoção horizontal,
atividade vertical, grooming, transições claro-escuro, tempo de latência para entrar na área escura
e tempo despendido na área clara. A dose letal da Erythrina verna (DL50e) foi de 1000mg/Kg e a
do Clonazepam (DL50c) foi de 50 mg/Kg. Assim, para o grupo Clonazepam i.p, dosagens mais
próximas da dose letal, produziram diversos efeitos colaterais, entre eles a exacerbação da
ansiedade, enquanto que, para o grupo Erythrina verna , doses mais próximas da dose letal,
produziram efeito ansiolítico. Nesse contexto, verifica-se que as dosagens terapêuticas para o
Clonazepam i.p são extremamente inferiores à sua dose letal e às dosagens que produziriam
efeitos colaterais, comprovando uma segurança terapêutica para diversos Transtornos Mentais
que cursam com ansiedade. Já em relação à Erythrina verna i.p, as doses terapêuticas se
aproximaram, em termos percentuais, à dose letal da mesma, porém não foram observados efeitos
colaterais, os quais foram observados no grupo Clonazepam, de acordo com os mesmos percentis
das doses letais. Portanto, comprova-se uma segurança terapêutica para os dois medicamentos,
produzindo efeitos terapêuticos que se equivalem, principalmente no controle dos Transtornos
Mentais que cursam com ansiedade.
Palavras chaves: Erythrina verna, efeito sedativo, Clonazepam, ansiedade, modelos animais.
_________________________
1
Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade Federal de Uberlândia – [email protected]
2
Faculdade de Medicina da Universidade Federal de Uberlândia – [email protected]
2
COMPARATIVE STUDY OF THE ANXIOLYTIC EFFECT Erythrina verna
(MULUNGU) AND CLONAZEPAM (RIVOTRIL) IN ANIMAL ANXIETY MODEL
WILSON FELIPE PEREIRA1 MARCELO QUIRINO DE MOURA MACHADO2
ABSTRACT
The intense intra-peritoneal administration effect (i.p) of the Erythrina verna (EV,
leguminosae, Papilionaceae) and Clonazepam hydro-alcoholic extract in male swiss mice
submitted to open field and bright-dark box tests, compared according to percentages of 5, 10, 20
and 50 in relation to their respective lethal doses. In these models behavior such as horizontal
locomotion activity, vertical activity, grooming, clear-dark transitions, delay time to enter into
dark area and time spent in the bright area were analyzed. The lethal dose of Erythrina verna
(DL50e) was 1000mg/Kg and that of Clonazepam (DL50c) was 50 mg/Kg. So, for the
Clonazepam group, dosages nearer to the lethal dose, produced several collateral effects, among
them anxiety exacerbation, while, for the Erythrina verna group, doses nearer to the lethal dose
produced an anxiolytic effect. In this context, it was verified that the therapeutic dosages for
Clonazepam i.p are extremely inferior to their lethal dose and to those dosages which would
produce collateral effects and so proving a therapeutic safety for several Mental Upsets which
accompany anxiety. Already in relation to Erythrina verna i.p, the therapeutic doses approached,
in percentage terms to the lethal dose of same, however no collateral effects were observed like
those which were observed in the Clonazepam group, according to the same percentages in
relation to the respective lethal doses. Therefore, a therapeutic safety is proven for the two
medicines, producing therapeutic effects which are equivalent, mainly in the control of Mental
Upset which accompanies anxiety.
Key words: Erythrina verna, sedative effect, Clonazepam, anxiety, animal models.
_________________________
1
Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade Federal de Uberlândia – [email protected]
2
Faculdade de Medicina da Universidade Federal de Uberlândia – [email protected]
3
síndrome da boca ardente (Valenca et al,
1 – INTRODUÇÃO
2000).
Os benzodiazepínicos constituem um
Já a Erythrina verna, pertence à
grupo de medicamentos que são amplamente
família das Fabaceae, sendo uma espécie
prescritos no tratamento de transtornos
arbórea nativa do litoral sudeste, medindo
psiquiátricos que cursam com ansiedade,
cerca de 15 metros, com flores vermelho
sendo uma opção segura e de baixa
vivo em cacho, folhas compostas, trifoliadas
toxicidade.
e grandes em média atingindo 12cm
Estima-se que 50 milhões de pessoas
(ÁRVORES BRASIL, 2005).
Conhecida
façam uso diário de benzodiazepínicos,
popularmente por mulungu e suiná-suinã,
sendo a maior prevalência entre mulheres
sua
acima de 50 anos de idade, correspondendo
brasileiros como sedativo natural para
a
diminuir agitação, ansiedade, tosse de fundo
50%
do
total
de
prescrição
de
psicotrópicos.
Neste
casca
é
utilizada
por
indígenas
nervoso e insônia. Além disso, é também
contexto,
o
Clonazepam
pertence à classe dos benzodiazepínicos, que
indicada como anticonvulsivante e em caso
de dores reumáticas (MATOS, 2002).
são medicamentos que atuam no Sistema
Onusic et al. (2002), analisando o
Nervoso Central, sendo seus principais
efeito agudo do tratamento com extrato
efeitos sedação, hipnose, diminuição da
hidroalcoólico
ansiedade, relaxamento muscular, amnésia
sugeriram a partir dos seus achados, efeito
anterógrada e atividade anticonvulsivante
ansiolítico comparável ao apresentado pelos
(Goodman & Gilman, 2003).
benzodiazepínicos.
de
Erythrina
mulungu,
Segundo o Bulário Eletrônico da
Assim, serão comparados os efeitos
Agência Nacional de Vigilância Sanitária do
ansiolíticos do Clonazepam em relação ao
Brasil (ANVISA), as principais indicações
Mulungu através de testes utilizando um
do Clonazepam são: distúrbios epiléticos,
modelo animal de ansiedade.
transtornos
de
ansiedade,
com
grande
eficácia no tratamento do transtorno do
pânico e humor, síndromes psicóticas e das
pernas inquietas, além de vertigens e a
4
linhagem Swiss com idade de 4 semanas,
2 – MATERIAIS E MÉTODOS
pesando entre 20 e 30g, provenientes do
Plantas - Foram utilizadas cascas de
Erythrina
verna
(espécie
Instituto Valle, foram mantidos no Biotério
previamente
da Universidade Federal de Uberlândia, em
reconhecida pelo Herbário da Universidade
gaiolas coletivas até a realização dos ensaios
Federal de Uberlândia) provenientes da
farmacológicos. A temperatura da sala foi
Fazenda Estrela Dalva, nordeste de Minas a
mantida em cerca de 22 º C, com luz entre
47 KM da Comarca de Santa Maria do
7:00 e 19:00h. Água e alimento foram
Suaçuí-MG.
oferecidos ad libitum. O estudo está em
concordância com o Guia de Princípios de
Preparação
do
extrato
hidroalcoólico - As cascas do mulungu
Pesquisas Biomédicas Envolvendo Animais
(GUIDING, 2007).
foram lavadas e em seqüência submetidas à
secagem na estufa de ventilação forçada e
Ensaios
farmacológicos
-
Para
secagem – Fanen - numa temperatura de
realização dos bioensaios, o resíduo sólido
40ºC por 48 horas. Subseqüentemente as
de Erythrina verna foi suspenso em solução
cascas foram submetidas à trituração no
salina a 0,9% e dimetilsulfóxido DMSO a
moinho de faca.
2% (ALVES, 2007). Todas as soluções
A partir da casca triturada, foi obtido
foram preparadas no dia do experimento e
extrato hidroalcoólico, utilizando-se 70% de
administradas via intraperitoneal (i.p.) em
álcool PA e 30% de água destilada para cada
volume de 0.5 ml.
200g da casca triturada. A solução foi
agitada diariamente durante um minuto, por
15 dias e em seguida filtrada.
Dose Letal da Erytrina verna
(DL50e) - A dose letal foi pesquisada
A solução filtrada foi submetida à
empiricamente. A princípio, foi escolhida
secagem em um evaporador rotatório sob
uma
pressão reduzida e à temperatura inferior a
10000mg/Kg
50º C. O líquido obtido foi congelado e
intraperitonealmente em 6 camundongos. A
posteriormente
taxa de letalidade foi observada por um
liofilizado,
obtendo-se
resíduo sólido.
Animais - Camundongos machos da
dose
de
a
extrato
qual
da
foi
ordem
de
administrada
período de 24 horas. A partir do resultado da
aplicação da dose de 10000mg/kg, foram
5
administradas doses maiores ou menores e
compartimentos ocupou 2/3 da caixa e foi
por tentativa e erro estimada a Dose Letal
pintado iluminado com lâmpada de 100 W.
(DL50) da Erythrina verna, definida como
O outro compartimento ocupou 1/3 da caixa
aquela em que 50% dos camundongos
e
estarão mortos (FARMACOPÉIA, 1959).
compartimentos havia uma parede divisória
não
foi
iluminado.
Entre
os
e uma pequena abertura de tamanho 7,5 x
Dose letal do Clonazepam (DL50c)
7,5. A lâmpada foi colocada a 40 cm de
- Inicialmente, foi escolhida uma dose da
altura da caixa. Este modelo de aparato é
ordem de 0,4ml/g, tendo como referência a
semelhante ao idealizado por Costall et
dose inicial para recém-nascidos e crianças
al.(1989).
de até 10 anos de idade ou 30 Kg de peso
corpóreo,
devido
dos
Teste “Open field” - O aparato
camundongos, devendo estar entre 0,01 e
circular de madeira medindo 60 cm de
0,03
0,05
diâmetro e 30 cm de altura foi divido em 4
mg/Kg/dia (ANVISA, 2007). Estas doses
circunscrições, divididas em 8 quadrantes. O
foram administradas intraperitonealmente
aparato foi iluminado por uma lâmpada de
em 6 camundongos. Foi observada a
100 W, colocada a uma altura de 40 cm.
mg/Kg/dia
ao
não
baixo
peso
excedendo
letalidade em um período de 24 horas. A
partir do resultado da aplicação de 0,4ml/g
Teste
“Caixa
claro-escuro”
-
baseado no índice de letalidade, foram
Grupos de camundongos Swiss (n=6) foram
escolhidas doses maiores ou menores que
tratados intraperitonealmente com doses de
0,4ml e por tentativa e erro foi estimada a
50 mg/Kg, 100 mg/Kg, 200 mg/Kg e 500
Dose
Clonazepam
mg/Kg de Erythrina verna. Em relação ao
(Rivotril), em que 50% dos camundongos
Clonazepam, foram utilizadas as doses 2,5
provavelmente estarão mortos, (Meyer et
mg/Kg, 5 mg/Kg, 10 mg/Kg e 25 mg/Kg. As
al.1982).
doses
Letal
(DL50)
do
utilizadas
para
os
dois
grupos
Aparatos - Teste “Caixa claro-
corresponderam aos percentis 5, 10, 20 e 50
escuro”- O aparato foi feito de madeira em
em relação às suas respectivas doses letais.
caixa retangular de tamanho exterior de 46 x
Após 30 minutos da administração da dose,
27 x 30 cm (c x l x h), dividida internamente
o animal foi colocado individualmente no
em
interior da caixa no compartimento claro e
dois
compartimentos.
Um
dos
6
seu comportamento observado e registrado
animal muda totalmente de quadrante),
por dois pesquisadores durante 5 minutos.
freqüência de atividade vertical e freqüência
Foram utilizados como parâmetro de análise,
de atividade de grooming (atividade de
conforme citado pela literatura o tempo de
limpeza). Foram administrados 0.5 ml de
latência para a primeira passagem do
solução salina a 0,9% e DSMO 2% nos
camundongo do compartimento claro para o
grupos controles. Os camundongos deste
escuro, o tempo despendido na área clara e o
grupo foram submetidos aos testes citados
número
acima.
de
compartimentos
transições
entre
(HASCOËT;
os
BOURIN,
Análise
2002).
estatística
-
As
ferramentas estatísticas utilizadas para a
Teste no Open field - Grupos de
camundongos Swiss (n=6) foram tratados
intraperitonealmente (i.p) com doses de 50
mg/Kg, 100 mg/Kg, 200 mg/Kg e 500
mg/Kg de Erythrina verna. Em relação ao
Clonazepam, foram utilizadas as doses 2,5
mg/Kg, 5 mg/Kg, 10 mg/Kg e 25 mg/Kg.
Após
30
minutos
camundongos
do
foram
tratamento,
os
colocados
individualmente no centro do open field. O
comportamento
do
camundongo
foi
observado e registrado durante 10 minutos
por dois pesquisadores, sendo analisados os
seguintes
parâmetros:
freqüência
de
locomoção horizontal (considerada quando o
obtenção dos resultados foram os testes de
Pearson e ANOVA, um critério, seguida do
teste post-hoc de Turkey. A partir dos
resultados obtidos através dos testes Open
field e “Caixa caixa claro-escuro”, foram
aplicados os testes de Pearson e ANOVA,
um critério, realizando a comparação do
comportamento dos animais em relação aos
percentuais 5%, 10%, 20% e 50% das doses
letais da Erythrina verna e do Clonazepam,
com posterior aplicação do teste post-hoc de
Turkey. Os dados foram considerados
estatisticamente
significantes
quando
p<0.05. O software Bioestat 3.0 foi utilizado
para a realização das análises.
7
Em relação à atividade horizontal,
3. RESULTADOS
para os percentuais comparativos de 10%,
20% e 50% das doses letais i.p do
Dose Letal da Erythrina verna
Clonazepam, em relação à Erythrina verna,
A dose letal foi estimada em 1000
houve diferença estatisticamente significante
mg/Kg. Foram testadas as doses de 10000
entre os respectivos comportamentos dos
mg/Kg, 7.500 mg/Kg, 5000 mg/Kg, 3000
camundongos (p<0,05) (tabela 1). Nesses
mg/Kg, 1500mg/Kg de Erythrina verna i.p
percentuais observou-se exacerbação dos
obtendo-se taxa de letalidade de 100%. A
movimentos horizontais para o grupo tratado
administração da dose de 500 mg/Kg de EV,
com
resultou em taxa de letalidade de 16%. A
deslocamento superiores ao grupo tratado
administração de 1000 mg/Kg de i.p resultou
com a Erythrina verna e aos respectivos
numa taxa de letalidade de 50%. Mediante
grupos controles (figura1).
estes resultados, concluiu-se que a dose letal
Clonazepam,
com
médias
de
O percentil 50, das doses letais
comparativas de deslocamento horizontal,
da Erythrina verna é de 1000 mg/Kg.
foi o que obteve a maior diferença
estatisticamente
Dose Letal do Clonazepam
significativa
(p=0,0056),
portanto, com exacerbação do deslocamento
A dose letal foi estimada em
horizontal
do
grupo
tratado
com
50mg/Kg. Foram testadas as doses de 100
Clonazepam em relação ao da Erythrina
mg/Kg, 50 mg/Kg, 30 mg/Kg e 10mg/Kg de
verna (tabela 1).
de
Já na atividade vertical, não houve
para a dose de
diferenças estatisticamente significantes em
100mg/Kg, de 50% para a dose de 50 mg/Kg
relação aos percentuais das doses letais
e, nas demais doses, não houve taxa de
testadas, com uma diminuição semelhante
letalidade.
resultados,
desta atividade nos grupos da Erythrina
concluiu-se que a dose letal do Clonazepam
verna e do Clonazepam comparados aos sus
é de 50 mg/Kg.
respectivos grupos controles (fig 2).
Clonazepam
i.p
letalidade de
Open field
obtendo-se
100%
Mediante
estes
taxa
200
50
5%
%
le
ro
nt
Co
5%
%
10
%
20
%
50
ro
Co
nt
%
0
0
10
50
400
%
100
600
20
Locomoção Horizontal (n)
150
le
Locomoção Horizontal (n)
8
Percentuais em relação à dose letal ( Erythrina Verna )
Pe rce ntuais e m re lação à dose le tal (Clonaze pam)
Fig1. Gráficos comparativos dos efeitos da administração intraperitoneal de Erythrina verna (i.p) e Clonazepam
(i.p), em relação à locomoção horizontal dos camundongos submetidos ao teste open field, de acordo com os
percentuais das respectivas doses letais (1000mg/Kg e 50mg/Kg), comparadas aos grupos controle. Dados são
expressos como média ± DP. Doses, n= 6; controle n=24.
80
Locomoção Vertical (n)
40
30
20
10
0
60
40
20
Percentuais em relação à dose letal ( Erythrina Verna)
5%
%
10
%
20
%
50
on
tro
le
5%
%
10
%
20
%
50
C
on
tr o
le
0
C
Locomoção Vertical (n)
50
Percentuais em relação à dose letal (Clonazepam)
Fig2. Gráficos comparativos dos efeitos da administração intraperitoneal de Erythrina verna (i.p) e Clonazepam
(i.p), em relação à locomoção vertical dos camundongos submetidos ao teste open field, de acordo com os
percentuais das respectivas doses letais (1000mg/Kg e 50mg/Kg), comparadas aos grupos controle. Dados são
expressos como média ± DP. Doses, n= 6; controle n=24.
9
Análises
Locomoção horizontal
Atividade vertical
Atividade de grooming
Tempo na área clara
Tempo de latência
Transições claro-escuro
Doses de
EV
1
2
3
4
1•
P
F
GL
0.0056*
0.0212*
0.0074*
0.0792
__
12.4653
7.3208
11.2063
3.7453
__
1
1
1
1
_
2
3
4
1
2
3
4
1
2
3
4
1
2
3
4
1
0,5484
0.9106
0.2853
0.0320*
0.1146
0.2360
0.0362*
0.0077*
0.0969
0.5747
0.6750
0.0725
0,5293
0.2314
0.9769
0,0046*
0,6284
0.0122
1.2743
6.0701
2.9385
1.5810
5.7288
11.0538
3.2961
0.7048
0.1893
3.9498
0,5766
1.6135
0.0008
13.4264
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
3
4
0.2593
0.0150*
0.1654
1.4257
8.4721
2.2124
1
1
1
Tabela 1. Efeitos do tratamento com doses 1. 50%, 2. 20% 3. 10% 4. 5% da dose letal de extrato
hidroalcoolico de Erythrina verna (i.p.) comparadas com grupo tratado com Clonazepam tendo
os mesmos percentuais em relação à dose letal deste último medicamento, analisando os
seguintes critérios: atividade horizontal, atividade vertical, grooming, tempo na área clara, tempo
de latência, transições claro-escuro. *p<0.05 (ANOVA, seguido de teste de Turkey). •A dose 1 da
atividade vertical não houve nível de significância estatístico para aplicação dos testes, dada a
semelhança do comportamento ente os camundongos tratados com Erythrina verna e com
Clonazepam.
10
Na avaliação da atividade de
diferenças
médias
de
deslocamento
grooming, houve diferenças estatisticamente
estatisticamente significantes nos percentis
significantes na comparação entre os grupos
10 e 50 em relação à dose letal, com
Clonazepam e o Erythrina verna, nos
superioridade
percentis 5 e 50 em relação à dose letal,
Clonazepam em relação ao da Eryhtrina
sendo que no primeiro grupo houve médias
Verna, porém, somente no percentil 10
de atividade de grooming superiores ao
houve aumento da média de transições para
segundo grupo (tabela 1) (figura 3).
o grupo Clonazepam em relação ao seu
das
médias
do
grupo
grupo controle, enquanto que para o
percentil 50 os dois grupos obtiveram
Caixa claro-escuro
médias de deslocamento inferiores ao de
Em relação ao tempo despendido na área
clara
houve
diferença
estatisticamente
significante (p=0,0077) no percentil 50 da
dose
letal
nos
seus respectivos grupos controles (fig 6).
grupo
Coeficiente de Pearson
Clonazepam
comparados ao grupo Erythrina verna
Após a análise do Coeficiente de
(tabela 1). O primeiro grupo possui médias
Pearson, obtido através dos valores médios
de permanência na área clara superiores ao
dos diversos parâmetros observados nos
segundo grupo (figura 4).
testes caixa claro-escuro e open field e seu
Na investigação do tempo de latência
comportamento com aumento das doses i.p
na área clara para primeira passagem para a
nos grupos Clonazepam e Erythrina Verna,
câmara
diferença
não se observou correlação estatisticamente
no
significante entre esses grupos e seus
dois
respectivos grupos controles (tabelas 2 e 3).
grupos, porém, quando analisados o grupo
Houve ainda, uma tendência de aumento na
Clonazepam e o da Erythrina verna com
atividade de grooming com o aumento das
seus respectivos grupos controles, ambos
doses i.p de Clonazepam (p=0,077)(tab 3).
escura,
estatisticamente
comportamento
não
houve
significante
comparativo
dos
obtiveram médias de tempo de latência
superiores aos seus controles (figura 5).
Em relação ao número de transições
entre os compartimentos claro-escuro, houve
11
15
20
Groom ing
Groom ing
15
10
5
10
5
0
5%
%
10
%
20
%
Co
50
nt
ro
le
5%
%
10
%
20
%
50
co
nt
ro
le
0
Percentuais em relação à dose letal ( Erythrina Verna )
Percentuais em relação à dose letal (Clonazepam)
Fig3. Gráficos comparativos dos efeitos da administração intraperitoneal de Erythrina verna (i.p) e Clonazepam
(i.p), em relação ao grooming dos camundongos submetidos ao teste open field, de acordo com os percentuais das
respectivas doses letais (1000mg/Kg e 50mg/Kg), comparadas aos grupos controle. Dados são expressos como média ±
DP. Doses, n= 6; controle n=24.
250
Tempo na área clara (s)
200
100
200
150
100
50
Percentuais em relação à dose letal ( Erythrina Verna )
5%
%
10
%
20
%
50
nt
ro
5%
%
10
%
20
%
50
le
ro
Co
nt
le
0
0
Co
Tempo na área clara (s)
300
Percentuais em relação à dose letal (Clonazepam)
Fig4. Gráficos comparativos dos efeitos da administração intraperitoneal de Erythrina verna (i.p) e Clonazepam
(i.p), em relação ao tempo na área clara, em segundos, despendido pelos camundongos submetidos ao teste caixa
claro-escuro, de acordo com os percentuais das respectivas doses letais (1000mg/Kg e 50mg/Kg), comparadas aos
grupos controle. Dados são expressos como média ± DP. Doses, n= 6; controle n=24.
Percentuais em relação à dose letal ( Erythrina Verna)
5%
%
10
%
20
50
%
0
le
5%
%
10
%
20
%
50
nt
ro
le
0
50
ro
50
100
nt
100
150
Co
150
Latência para entrar na área escura (s)
200
Co
Latência para entrar na área escura (s)
12
Percentuais em relação à dose letal (Clonazepam)
Fig5. Gráficos comparativos dos efeitos da administração intraperitoneal de Erythrina verna (i.p) e Clonazepam
(i.p), em relação à latência para entrar na área clara, em segundos, despendido pelos camundongos submetidos ao
teste caixa claro-escuro, de acordo com os percentuais das respectivas doses letais (1000mg/Kg e 50mg/Kg),
comparadas aos grupos controle. Dados são expressos como média ± DP. Doses, n= 6; controle n=24.
Transições (n)
40
10
5
20
10
Percentuais em relação à dose letal ( Erythrina Verna )
5%
%
10
%
20
%
50
le
nt
ro
5%
%
10
%
20
50
ro
Co
nt
%
0
le
0
30
Co
Transições (n)
15
Percentuais em relação à dose letal (Clonazepam)
Fig6. Gráficos comparativos dos efeitos da administração intraperitoneal de Erythrina verna (i.p) e Clonazepam
(i.p), em relação ao número de transições dos camundongos submetidos ao teste caixa claro-escuro, de acordo com
os percentuais das respectivas doses letais (1000mg/Kg e 50mg/Kg), comparadas aos grupos controle. Dados são
expressos como média ± DP. Doses, n= 6; controle n=24.
13
Análise
Atividade horizontal
Atividade vertical
Atividade de grooming
Tempo na área clara
Tempo de latência
Transições claro-escuro
R
-0.314
-0.1558
0.3123
-0.205
-0.0603
-0.3173
P
0.135
0.4673
0.1373
0.3366
0.7796
0.1307
N
24
24
24
24
24
24
Tabela 2. Análises de correlação (teste de Pearson) entre as doses 500, 200, 100, 50 mg/Kg de
Erythrina Verna i.p, correspondendo à respectivamente 50%, 20%, 10% e 5% da dose letal e
atividade horizontal, atividade vertical, grooming, tempo na área clara, tempo de latência,
transições claro-escuro.
Análise
Atividade horizontal
Atividade vertical
Atividade de grooming
Tempo na área clara
Tempo de latência
Transições claro-escuro
R
0.2307
-0.4147
0.9230
0.7872
-0.7652
-0.5306
P
0.7693
0.5853
0.0770
0.2127
0.2347
0.4694
N
24
24
24
24
24
24
Tabela 3. Análises de correlação (teste de Pearson) entre as doses 25, 10, 5, 2,5 mg/Kg de
Clonazepam i.p, corespondendo à respectivamente 50%, 20%, 10% e 5% da dose letal) e
atividade horizontal, atividade vertical, grooming, tempo na área clara, tempo de latência,
transições claro-escuro.
14
grupo tratado com Erythrina verna (figura
4. DISCUSSÃO
1).
O open field é um teste utilizado,
No grupo tratado com Clonazepam
para testar comportamento exploratório de
i.p houve a presença de movimentos
animais submetidos a tratamentos ansiolítico
circulares caóticos em relação ao próprio
e sedativo. Em uma situação habitual,
eixo corporal do animal, com a presença de
camundongos
se
tentativas de auto-agressão e aumento da
locomovendo próximo à parede do aparato.
irritabilidade. Vários estudos demonstram
Em camundongos tratados, um aumento do
que altas doses de benzodiazepínicos podem
tempo de atividade na área central sem
cursar com vários efeitos colaterais, dentre
alteração na atividade de locomoção total,
eles destacando o aumento da ansiedade,
assim como, maior tempo de latência para
irritabilidade,
entrar na periferia, são indicativos de efeito
inquietação, alucinações e comportamento
ansiolítico. No efeito sedativo é observado
hipomaníaco. Em outros trabalhos, contatou-
diminuição das locomoções horizontais,
se
assim como da atividade de grooming e da
desinibido bizarro, enquanto em outros
atividade vertical de exploração do ambiente
podem ocorrer hostilidade e raiva, sendo que
(BELZUNG et al., 2003).
em conjunto, essas reações são denominadas
preferem
a
periferia
Nesse estudo, a atividade total de
locomoção horizontal no open field para o
e
a
taquicardia,
presença
de
euforia,
comportamento
de desinibição ou descontrole (Goodman &
Gilman, 2003).
grupo tratado com Clonazepam i.p foi
A dose terapêutica preconizada para
superior ao tratado com Erythrina verna i.p
o Clonazepam, para crianças de até 10 anos
nos percentis 10, 20 e 50 em relação às
ou 30 Kg de peso está em torno de 0,01
respectivas doses letais (p<0,05) (tabela 1).
mg/Kg a 0,03 mg/Kg como dose inicial e em
Em comparação com os respectivos grupos
torno
controles, também houve um aumento das
manutenção (ANVISA, 2007). As doses de
médias de locomoção horizontal no primeiro
Clonazepam,
grupo e uma diminuição no segundo grupo,
foram de 2,5 mg/Kg (5% da DL50c), 5
indicando uma exacerbação da ansiedade,
mg/Kg (10% da DL50c), 10 mg/Kg (20% da
nesses percentis, para o grupo tratado com
DL50c) e 25 mg/Kg (50% da DL50c). Isso
Clonazepam e um efeito ansiolítico para o
demonstra, que principalmente para os
de
0,1
mg/Kg
utilizadas
para
nesse
dose
de
trabalho,
15
percentis 10, 20 e 50, onde houve as
atividade quando comparados aos seus
diferenças estatisticamente significantes em
respectivos grupos controles (tabela 1)
relação ao grupo da Erythrina verna ,
(figura
ocorreu a exacerbação da ansiedade no
miorrelaxante nos percentis de dose letal
grupo Clonazepam, juntamente com efeitos
analisados nos dois grupos, pelo fato da
colaterais,
sido
atividade vertical estar relacionada com a
utilizadas doses extremamente superiores ao
exigência de maior esforço muscular e
nível
medicamento
equilíbrio para a realização desta atividade
oscilando em torno de 50 a 250 vezes em
do que o necessário para a realização da
relação
atividade de locomoção horizontal.
justamente
terapêutico
à
dose
por
deste
de
terem
manutenção
para
tratamento de crianças de 10 anos ou 30 Kg
de peso.
2).
Isso
demonsta
efeito
Na análise do grooming, houve
diferenças
estatisticamente
significantes
Já no grupo tratado com Erythrina
entre os grupos Clonazepam e Erythrina
verna i.p, nos mesmos percentis da dose letal
verna para os percentis 5 e 50 (p<0,05),
utilizadas para o Clonazepam, porém com
porém somente no percentil 50 houve
dosagens diferentes pelo fato das doses letais
superioridade
de
valores
Clonazepam em relação ao seu grupo
diferenciados, como citado anteriormente,
controle, sendo que para o grupo Erythina
houve efeitos ansiolíticos e hipnóticos,
verna houve diminuição da atividade para os
sendo portanto, terapêutico em dosagens
percentis 5 e 50 em relação aos seus grupos
mais próximas da dose letal ao contrário da
controles
terapêutica
que
exacerbação de efeitos colaterais, como o
dosagens mais próximas da dose letal
aumento da ansiedade, para dosagens mais
produziram diversos efeitos colaterais com
próximas da letal, em relação ao grupo
exacerbação da ansiedade e irritabilidade,
Clonazepam e atividade ansiolítica para os
sendo sua dose terapêutica extremamente
mesmos percentis em relação ao grupo
inferior à dose letal
Erythrina verna. Na aplicação do coeficiente
cada
grupo
com
possuírem
Clonazepam,
em
Em relação à atividade vertical, não
houve
diferenças
do
(figura
grooming
3).
Isso
no
grupo
ratifica,
a
de Pearson, para o grooming, esta foi a única
estatisticamente
atividade que representou uma tendência de
significantes entre o comportamento dos
aumento com a elevação da dose de
dois grupos, com diminuição global dessa
Clonazepam (p=0,0770) (tabela 3).
16
No teste caixa claro-escuro, uma
comportamento entre os dois grupos, com
tendência à permanência na área clara, (tida
aumento desse período quando comparados
como ambiente aversivo para camundongos
aos seus respectivos grupos controles,
normais) sem alteração da atividade de
ratificando
locomoção total, indica padrão ansiolítico e
ansiolítico
miorrelaxante , assim como maior tempo de
horizontal no teste open fiel para o grupo
latência para entrar na área escura e a
Clonazepam e um efeito ansiolítico para o
diminuição do número de transições entre os
grupo Erythrina verna, independente dos
ambientes claro e escuro.
testes realizados (figura 5).
um
após
efeito
miorrelaxante
excessiva
e
atividade
Quando se analisa o tempo de
O número de transições caixa claro-
permanência na área clara, houve diferença
escuro foi exacerbado para o percentil 10 no
no
grupos
grupo Clonazepam em comparação com o
Clonazepam e Erythrina verna somente para
grupo Erythrina verna e os respectivos
o percentil 50, com aumento deste tempo no
grupos controles, sendo, portanto, mais uma
primeiro grupo em relação ao seu grupo
evidência do aumento da ansiedade para o
controle e diminuição do segundo grupo em
grupo Clonazepam em dosagens próximas à
relação ao seu grupo controle. Porém, no
dose letal (p<0,05) (figura 6).
comportamento
entre
os
percentil 20, para a Erythrina verna, houve
aumento desta atividade em relação ao seu
grupo controle. Isso demonstra, que, no
percentil 50 para o grupo Clonazepam,
apesar de haver exacerbação de efeitos
colaterais com o aumento da ansiedade, há
um efeito miorrelaxante, que aumenta, após
excessiva
atividade
de
locomoção
horizontal, uma vez que o teste caixa claroescuro foi realizado após o teste open field,
em que houve excessiva atividade horizontal
nesse percentil (figura 4).
Em relação ao tempo de latência na
área
clara
não
houve
diferença
de
17
equivalem, principalmente no controle dos
5. CONCLUSÃO
A partir desses dados, constatou-se
uma
diferença
comportamental
nos
diferentes percentis em relação às doses
letais dos grupos Clonazepam e Erythrina
verna. Assim, para o primeiro grupo,
dosagens mais próximas da dose letal,
produziram diversos efeitos colaterais, entre
eles a exacerbação da ansiedade, enquanto
que, para o segundo grupo, doses mais
próximas da dose letal produziram efeito
ansiolítico.
Nesse contexto, verifica-se que as
dosagens terapêuticas para o Clonazepam i.p
são extremamente inferiores à sua dose letal
e às dosagens que produziriam efeitos
colaterais, comprovando uma segurança
terapêutica
para
diversos
Transtornos
Mentais que cursam com ansiedade. Já em
relação à Erythrina verna i.p, as doses
terapêuticas se aproximaram, em termos
percentuais à dose letal da mesma, porém
não foram observados efeitos colaterais, os
quais
foram
observados
no
grupo
Clonazepam, de acordo com os mesmos
percentis em relação às respectivas doses
letais. Portanto, comprova-se uma segurança
terapêutica para os dois medicamentos,
desde que respeitados os limites de dosagens
em relação às suas respectivas doses letais,
produzindo efeitos terapêuticos que se
Transtornos
ansiedade.
Mentais
que
cursam
com
18
6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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