BIO-FLASH ® BIO-FLASH® CMV IgM

BIO-FLASH ®
LER ALTERAÇÕES DESTACADAS
®
BIO-FLASH CMV IgM
3000-8566
50 testes
BIO-FLASH CMV IgM é um ensaio imunológico quimiluminescente de dois passos totalmente
automatizado para a determinação qualitativa de anticorpos IgM anti-citomegalovírus em soro ou plasma
humano com o instrumento BIO-FLASH.
Sumário
O citomegalovírus (CMV) humano pertence à família dos Herpesvírus, que também inclui os vírus Herpes simplex
tipo 1 e 2, o vírus da Varicela Zoster e o vírus Epstein-Barr. Uma característica comum destes vírus é que podem
causar infecções latentes.1 O CMV é um agente ubíquo que normalmente infecta indivíduos de diversas áreas
geográficas e econômicas. A maior parte da população é infectada pelo vírus em algum momento da vida sendo
que nos Estados Unidos 81% dos indivíduos maiores de 35 anos foram expostos ao vírus.2 Uma característica do
CMV consiste em que depois da infecção primária, o vírus pode persistir em forma latente durante muito tempo e
pode reativar-se em um dado momento. A infecção, reinfecção ou reativação do CMV em adultos normais e
crianças geralmente é leve ou assintomática. No entanto, pode haver casos clinicamente graves em pacientes
imunodeprimidos e com câncer ou como resultado de uma infecção intrauterina ou peri-natal.1-8 As transfusões de
sangue e o transplante de órgãos são causas importantes de infecção por CMV em pacientes imunodeprimidos.9
É possível prevenir a transmissão de CMV a receptores de órgãos através da seleção de doadores, que devem
ser soronegativos de anticorpos anti-CMV. Outra causa importante de patologia em pacientes imunodeprimidos é
a reativação de vírus latentes endógenos, devido a terapias imunossupressoras.10 O diagnóstico sorológico da
infecção por CMV pode ser realizado mediante a detecção de um aumento significativo de anticorpos IgG
específicos para CMV em soros pareados e pela detecção de anticorpos IgM específicos para CMV. Os testes
sorológicos para a detecção de anticorpos anti-CMV proporcionam uma informação valiosa na determinação da
existência de uma infecção prévia, no diagnóstico de uma infecção ativa ou recente e no exame de sangue para
realizar transfusões a recém-nascidos e a receptores imunodeficientes.11
Princípio
Quando as micropartículas paramagnéticas de BIO-FLASH CMV IgM são misturadas e incubadas com a amostra,
se esta contém anticorpos específicos anti-CMV, estes se combinam com os antígenos de CMV que recobrem as
micropartículas. Depois de uma separação magnética e lavagem para eliminar resíduos da amostra, se adiciona
um traçador que consiste em um anticorpo monoclonal anti-IgM humana marcado com isoluminol que se une aos
anticorpos IgM anti-CMV capturados pelas micropartículas. Depois de uma segunda incubação, separação
magnética e lavagem, se adicionam os reagentes que ativam a reação quimiluminescente. O luminômetro do
BIO-FLASH mede a luz emitida como unidades relativas de luz (URL) que são diretamente proporcionais à
concentração de IgM anti-CMV da amostra.
O BIO-FLASH utiliza um método de redução de dados com ajuste a uma curva logística de 4 parâmetros (4PLC)
para gerar uma Curva de Calibração Mestre (CCM). Esta curva vem predefinida, depende do lote e é guardada no
instrumento através do código de barras do cartucho. Com a leitura dos calibradores (que se fornecem em um kit
separado), a CCM predefinida se transforma em uma Curva de Calibração de Trabalho (CCT) nova e específica
para o instrumento. As concentrações dos calibradores estão incluídas nos códigos de barras dos tubos dos
calibradores.
Esquema da reação:
Ativadores
(Triggers)
URL
Partícula magnética
Amostra
Traçador
Emissão de luz
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8566 R04 06.2015 por
0843
BIO-FLASH ®
Componentes
Cartucho de reagentes
O kit BIO-FLASH CMV IgM contém um cartucho de reagentes para 50 determinações (REF 3000-8566).
NOTA: O desenho do cartucho está protegido por patente (US D565,741 / Desenho CE 000762992-0001)
Composição do cartucho de reagentes:
O cartucho está composto por 4 frascos que contêm:
A.
1
frasco
cilíndrico
de
suspensão
de
micropartículas recobertas com antígeno de CMV
em tampão de glicina. Contém < 0,1% de azida
sódica.
B.
1 frasco de tampão de ensaio. Contém < 0,1% de
azida sódica.
C.
1 frasco opaco de traçador que consiste em
anticorpo monoclonal murino anti-IgM humana
marcado com isoluminol. Contém < 0,1% de
azida sódica.
D.
1 frasco vazio.
Preparação
Veja a figura seguinte.
Cartucho: as micropartículas sedimentam durante o transporte e o armazenamento, por isso é preciso misturá-las
para voltar a ressuspendê-las.
•
Antes de utilizar o cartucho pela primeira vez, inverta-o suavemente 30 vezes evitando a formação de
espuma (as bolhas podem fazer com que os sensores de líquido do instrumento dêem leituras errôneas).
•
Comprove que as micropartículas estejam totalmente em suspensão. Se não for assim, continue invertendo o
cartucho até que as partículas se ressuspendam totalmente.
•
Se as micropartículas não se ressuspendem ou detecta que o pré-cinto dos reagentes está furado, NÃO
UTILIZE O CARTUCHO.
•
Uma vez que as micropartículas estejam em suspensão, coloque o cartucho sobre uma superfície sólida e
retire com cuidado a lingüeta vermelha de segurança para o transporte.
•
Mantendo o cartucho sobre a superfície sólida, aperte as duas abas situadas nos dois lados da tapa
perfurante (peça cinza) e pressione a parte superior do cartucho até que fique em posição de bloqueio. Uma
vez em posição de bloqueio, as abas têm que ficar ocultas. Não inverta o cartucho aberto.
•
Deixe o cartucho repousar durante 5 minutos antes de carregá-lo no instrumento.
•
Uma vez carregado o cartucho, o instrumento mistura seu conteúdo de forma automática em intervalos
periódicos.
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8566 R04 06.2015 por
0843
BIO-FLASH ®
Precauções
Os reagentes BIO-FLASH são para diagnóstico IN VITRO.
Uso exclusivo para profissionais.
A azida sódica pode reagir com encanamentos e ralos de chumbo ou cobre originando azidas metálicas altamente
explosivas. Ao eliminar os restos de reagentes, fazê-lo em abundante volume de água.
ATENÇÃO: MATERIAL DE RISCO BIOLÓGICO.
Descartar todos os materiais usados em recipientes adequados para material bio-contaminante.
Por favor, não reutilize nem reintroduza reagentes nos cartuchos ou frascos.
Classe de perigo
Não classificado.
Advertências de perigo
Nenhuma.
Recomendações de prudência
P280: Usar luvas de proteção/vestuário de proteção/proteção ocular/proteção facial.
P305+351+388: SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com água durante
vários minutos. Se usar lentes de contato, retire-as, se tal lhe for possível. Continuar a enxaguar.
Coleta e conservação das amostras
Usar soro fresco (também se pode utilizar tubos com gel separador de soro) ou plasma (EDTA, Li-heparina,
Li-heparina em tubo com gel separador, Na-heparina e Na-citrato). Outros anticoagulantes devem ser
comprovados antes de utilizar-se. Os anticoagulantes líquidos como o Na-citrato exercem um efeito de diluição e
podem reduzir a concentração de amostras de pacientes. As amostras não devem ser inativadas por calor. As
partículas em suspensão devem ser eliminadas por centrifugação. Nas diretrizes CLSI H18-A3 e H21-A5
encontrará mais informação sobre o manuseio, o transporte, o processamento e a conservação das amostras.
Soro
As amostras de soro podem ser conservadas a 2-8°C durante 8 dias. Para um período de tempo mais longo, devem
ser congeladas a uma temperatura igual ou inferior a -20°C. As amostras podem congelar-se/descongelar-se no
máximo 3 vezes. Misturá-las bem depois de descongelar. Comprove que não haja bolhas nas amostras e, em caso
contrário, elimine-as todas antes da análise.
Plasma
As amostras de plasma podem ser conservadas a 2-8°C durante 8 dias. Para um período de tempo mais longo,
devem ser congeladas a uma temperatura igual ou inferior a -20°C. Descongelar o plasma a 37°C. Descongelar as
amostras somente uma vez. Misturá-las bem depois de descongelar. Comprove que não haja bolhas nas
amostras e, em caso contrário, elimine-as todas antes da análise.
Volume de amostra
O volume de amostra necessário para realizar um único teste com BIO-FLASH CMV IgM varia em função do tipo
de recipiente que se utilize. Um teste requer ao menos 15 µL mais o volume morto, que é de 200 µL se é utilizada
a copa de amostra recomendada (REF 3000-8209).
Outros materiais
Os seguintes materiais não são fornecidos com o cartucho de reagentes e devem ser comprados por separado.
REF 3000-8638
BIO-FLASH CMV IgM Calibrators (Calibradores)
REF 3000-8639
BIO-FLASH CMV IgM Controls (Controles)
Leia com atenção as instruções correspondentes se deseja mais informação.
Não utilize outros calibradores. A informação que necessita o instrumento BIO-FLASH para calibrar o ensaio
BIO-FLASH CMV IgM está incluída nos códigos de barras dos tubos.
Utilizar controles de outros fabricantes pode dar lugar a resultados imprevistos.
Assegure-se de que no instrumento BIO-FLASH haja uma quantidade suficiente dos seguintes consumíveis antes
de processar amostras, calibradores ou controles:
REF 3000-8206
BIO-FLASH Cuvettes (Cubetas)
NOTA: O desenho das cubetas está protegido por patente (US D560,816 / Desenho CE 000762984-0001).
REF 3000-8204
BIO-FLASH Triggers (Ativadores)
REF 3000-8205
BIO-FLASH System Rinse (Solução do sistema)
REF 3000-8207
BIO-FLASH Sample Diluent (Diluente das amostras)
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8566 R04 06.2015 por
0843
BIO-FLASH ®
Instrumento / realização do ensaio
No Manual do Usuário do BIO-FLASH encontrará as instruções completas para realizar o ensaio.
Calibração
O código de barras do cartucho contém uma Curva de Calibração Mestre (CCM) que é válida para o lote de
reagentes. No entanto, para todos os reagentes se necessita uma Curva de Calibração de Trabalho (CCT), que é
específica para cada lote e válida até a data de validade do lote. É preciso obter uma nova CCT quando os
resultados dos controles saiam fora do intervalo de aceitação ou quando se tenha realizado ajustes no
instrumento.
Leia com atenção o Manual do Usuário do BIO-FLASH para configurar uma CCT.
Controle de qualidade
Para realizar um programa completo de controle de qualidade é recomendável passar dois níveis de controles. Os
controles BIO-FLASH CMV IgM negativo e positivo foram desenhados para tal programa. Recomenda-se que
cada laboratório estabeleça a sua própria média e desvio padrão e um programa de controle de qualidade para
monitorizar seus resultados. Os controles devem ser analisados ao menos cada 24 horas por dia de utilização. Se
os controles estão fora do intervalo pode ser necessário recalibrar o instrumento. No Manual do Usuário do
instrumento encontrará mais informação. Para a identificação e resolução de situações anormais de controle de
qualidade, consulte Westgard et al.12
Conservação e estabilidade
Os reagentes que não tenham sido abertos se mantêm estáveis até a data de validade indicada no rótulo do
cartucho se forem conservados a 2-8°C em posição vertical.
Uma vez aberto, a estabilidade do cartucho carregado no instrumento BIO-FLASH ou guardado a 2-8°C é de
14 semanas.
Interpretação de resultados
A quantidade de analito em cada amostra se determina a partir da luz emitida (URL) por interpolação na Curva de
Calibração de Trabalho guardada. Os resultados de BIO-FLASH CMV IgM são expressos como S/CO (Sinal da
amostra/Valor de corte). Como o ensaio é qualitativo, o valor numérico do resultado só é indicativo da quantidade
de anticorpos presentes.
A determinação das IgM anti-CMV com o ensaio BIO-FLASH CMV IgM ajuda no diagnóstico de uma infecção
recente.
•
•
•
As amostras com um resultado < 0,90 S/CO são consideradas não reativas (negativas).
As amostras com um resultado ≥ 0,90 e < 1,10 S/CO são consideradas indeterminadas (zona cinza). As
amostras que se interpretem como indeterminadas deverão ser re-analisadas Se ao repetir se obtém um
resultado indeterminado, deve-se reportar como tal e deve ser realizado outro ensaio com um método
alternativo ou obter e testar uma segunda amostra.
As amostras com um resultado ≥ 1,10 S/CO são consideradas reativas (positivas).
Como em todos os ensaios imunológicos sensíveis, existe a possibilidade de obter resultados positivos que não se
repitam. Um resultado negativo não exclui a possibilidade de infecção por CMV. Uma possível soro-conversão
deve ser confirmada determinando as IgG específicas com, por exemplo, BIO-FLASH CMV IgG REF 3000-8563,
analisando amostras pareadas tomadas com um intervalo de 2-4 semanas.
Limitações
O resultado de uma única amostra não é suficiente para diagnosticar uma infecção primária por CMV. Portanto,
além dos resultados de BIO-FLASH CMV IgM é preciso levar em conta outros dados como, por exemplo, a
sintomatologia, a história clínica, os resultados de outras provas, e toda a informação adicional relevante.
Os anticorpos heterófilos do soro humano podem reagir com as imunoglobulinas dos reagentes e causar
interferências nos ensaios imunológicos in vitro.13 Os dados obtidos podem indicar que a presença de anticorpos
heterófilos na amostra pode dar lugar a falsos positivos.
Resultados esperados
A infecção por CMV pode ocorrer em qualquer idade, inclusive na etapa fetal. Cerca de 50% dos adultos jovens da
Europa Central estão infectados por CMV. Aproximadamente 70%-80% da população de maior idade são
soropositivos. Depois do nascimento, o índice de manifestação da infecção por CMV é inferior a 1% em pessoas
imunocompetentes.14 Em um estudo realizado nos Estados Unidos, a prevalência da infecção por CMV foi de
58,9% em pessoas com mais de 6 anos de idade. A soro-prevalência de CMV aumentou gradualmente com a
idade, de 36,3% em crianças de 6-11 anos a 90,8% em pessoas com mais de 80 anos.15
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8566 R04 06.2015 por
0843
BIO-FLASH ®
Características funcionais
NOTA: os seguintes dados são representativos; os resultados em experimentos isolados podem variar respeito a
estes dados.
Comparação de métodos
BIO-FLASH CMV IgM foi avaliado em estudos comparativos com outros ensaios comerciais.
Avaliações
Foi realizada uma avaliação interna e outra externa no Servei de Microbiologia do Hospital de la Santa Creu i Sant
Pau de Barcelona (Espanha). Na avaliação interna foram analisadas com BIO-FLASH CMV IgM 154 amostras de
diferente procedência que incluíam soros positivos e negativos de anticorpos IgM anti-CMV e os resultados foram
comparados com os obtidos com um método de EIA CMV IgM comercial. Na avaliação externa foram analisadas
com BIO-FLASH CMV IgM 311 amostras de diferente procedência que incluíam soros positivos e negativos de
anticorpos IgM anti-CMV e os resultados foram comparados com os obtidos com um método comercial, ELFA
CMV IgM. Apresentam-se os resultados globais. Os resultados indeterminados não foram considerados para os
cálculos.
Método de referência
BIO-FLASH
CMV IgM
IND
NEG
POS
Total
IND
NEG
POS
Total
0
3
0
3
5
338
16
359
0
8
95
103
5
349
111
465
Foram obtidos os seguintes resultados iniciais de sensibilidade e especificidade relativas e concordância global:
N
457
Sensibilidade relativa
Valor
IC 95%
92,2% 85,3% a 96,6%
Especificidade relativa
Valor
IC 95%
95,5% 92,8% a 97,4%
Concordância global
Valor
IC 95%
94,7% 92,3% a 96,6%
As amostras discrepantes foram analisadas com métodos de ELFA CMV IgM e EIA CMV IgM comerciais. Quatro
das amostras se resolveram a favor de BIO-FLASH CMV IgM. Depois do ensaio adicional foram obtidos os
seguintes resultados finais de sensibilidade, especificidade e concordância global:
N
456
Sensibilidade final
Valor
IC 95%
94,2% 87,9% a 97,9%
Especificidade final
Valor
IC 95%
96,9% 94,5% a 98,4%
Concordância global final
Valor
IC 95%
96,3% 94,1% a 97,8%
Precisão
A precisão intra-ensaio e total (ensaio a ensaio e dia a dia) foram avaliadas em múltiplos ensaios, conforme as
diretrizes CLSI EP05-A. Os resultados estão resumidos na tabela seguinte:
Controle negativo
Controle positivo
Ao redor do valor de corte
Média (S/CO)
0,25
2,65
0,77
Intra-ensaio
0,016 SD
4,4% CV
6,5% CV
Total
0,023 SD
4,9% CV
10,2% CV
Interferências
Estudos segundo as diretrizes CLSI EP7-A demonstraram que as seguintes substâncias potencialmente
interferentes não alteram os resultados de BIO-FLASH CMV IgM:
Substância potencialmente interferente
Hemoglobina
Bilirrubina indireta
Bilirrubina direta
Triglicérides
Fator reumatoide
Concentração
500 mg/dL
18 mg/dL
18 mg/dL
1300 mg/dL
543 UI/mL
% Interferência
≤ 10
≤ 10
≤ 10
≤ 10
≤ 10
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8566 R04 06.2015 por
0843
BIO-FLASH ®
Reatividade cruzada
Quando foram analisadas 109 amostras com potencial de produzir reação cruzada com o ensaio BIO-FLASH CMV IgM
e os resultados foram comparados com ensaios comerciais de CMV IgM, foi obtida a seguinte concordância:
Reação cruzada potencial
Anti-HIV (anticorpos contra o vírus da imunodeficiência humana)
HAMA (anticorpo humano anti-murino)
SLE (Lupus eritematoso sistêmico)
ANA (anticorpos anti-nucleares)
Anti-EBV (anticorpos contra o vírus Epstein-Barr)
Anti-PV B19 (anticorpos contra Parvovírus B19)
Anti-HSV 1 (anticorpos contra o vírus Herpes simplex tipo 1)
Anti-VZV (anticorpos contra o vírus da Varicela Zoster)
Paraproteínas IgG e IgM
IgG e IgM elevadas
Anticorpos heterófilos
RF (Fator reumatoide)
Mulheres grávidas (multíparas incluídas)
Concordância
5/5
5/5
8/10
5/5
4/5
7/7
5/5
5/5
5/6
8/10
9/13
9/10
22/23
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8566 R04 06.2015 por
0843