Fernanda Carla Henrique

IV Encontro de Ciências Biológicas da Universidade
Estadual de Londrina “2013 – Ano Internacional de
Cooperação pela Água (06/08/2013 – 10/08/2013)”
OLIGONUCLEOTÍDEOS INICIADORES UNIVERSAIS Área Temática:
NA AVALIAÇÃO DA POPULAÇÃO BACTERIANA EM Genética
ECOSSISTEMAS COMPLEXOS
HENRIQUE, F. C.; COSTA, G. N.; VILAS-BOAS, L. A.; MIGLIORANZA, L. H. S.
Universidade Estadual de Londrina. [email protected]
Palavras-chave: RNA ribossomal, PCR, Microbiota fecal
Resumo
Abordagens envolvendo o RNA ribossomal da subunidade menor do ribossomo
tornaram-se um método padrão para se determinar a composição da comunidade
microbiana. O gene codificante para o RNA ribossomal 16S é considerado o
biopolímero mais adequado para estudos de diversidade, visto que é essencial para
a sobrevivência dos organismos e altamente conservado entre as espécies. Além
disso, este gene pode ser obtido diretamente de uma amostra sem necessidade de
procedimentos de cultura, o que permite a detecção de basicamente todos os
membros do ecossistema, incluindo aqueles que não são cultiváveis. A aplicação de
oligonucleotídeos iniciadores universais para amplificação direta do rRNA 16S, por
meio de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) do DNA total de uma comunidade
microbiana, combinada com tecnologias de clonagem e sequenciamento têm
gerado uma vasta quantidade de dados sobre a diversidade de procariotos em
ecossistemas microbianos complexos. Na presente investigação, foram analisadas
a presença bacteriana e possíveis alterações no perfil da microbiota fecal durante e
após o consumo de leite fermentado probiótico. A linhagem Lactobacillus plantarum
– Lp 115 foi utilizada para produção de leite fermentado e o produto aplicado em um
estudo clínico envolvendo 61 indivíduos, os quais receberam diariamente doses do
leite fermentado contendo 2 x 1011 UFC/dose da espécie alvo por noventa dias.
Amostras fecais foram fornecidas no início, durante e após a interrupção da terapia.
O DNA das amostras fecais de 10 indivíduos selecionados, nos 3 períodos de
ingestão, foi extraído e o gene codificante para o RNA ribossomal 16S amplificado
por meio da técnica de PCR com a utilização de oligonucleotídeos iniciadores
universais (fD1, rD1). Após obtenção das bandas de amplificação entre 275 a 1500
pb, foram verificadas variações em função do consumo do leite fermentado, por
meio da análise comparativa dos 3 períodos de ingestão. Os dados deste trabalho
demonstraram alterações no perfil da microbiota fecal dos indivíduos submetidos ao
tratamento e, consequente, sensibilidade e eficiência da PCR em conjunto com o
marcador molecular 16S rRNA na amplificação do universo bacteriano em amostra
de ecossistema complexo.
Apoio Financeiro: CNPq