PosterIC2000

PROSDOCIMI, Francisco C. S.; ZUCCONI, Eder; KALAPOTHAKIS,
Evanguedes; ANDRADE, Renato (c); GODINHO, Hugo (c);
GODINHO, Alexandre (c)
Departamento de Farmacologia e Departamento de Morfologia
ICB-UFMG
As construções de barragens hidrelétricas nas grandes bacias
fluviais do país, apesar de reconhecidos aspectos utilitários,
causam impactos sobre a ictiofauna, como a interrupção de vias
migratórias de peixes. Nesses casos, segundo a legislação
vigente, é obrigatória a construção de mecanismos – altamente
dispendiosos – de transposição de peixes, a não ser que seja
comprovado que tal medida é desnecessária. Para verificar a
necessidade de construção desses mecanismos em barragens do
Rio Grande (MG), deve ser feito um estudo de variabilidade
genética entre populações de peixes locais. Com esse objetivo
estão sendo isolados e caracterizados locos de microsatélites da
espécie Prochilodus scrofa, conhecida popularmente como
curimbatá. Para o isolamento desses locos foi construída uma
biblioteca de DNA genômico do peixe, que foi hibridizada com
seqüências
de
oligonucleotídeos
repetitivas
marcadas
radioativamente. Os clones positivos estão sendo seqüenciados
para a confirmação das regiões de microsatélites e para o
reconhecimento
das
regiões
flanqueadoras.
Primers
complementares às regiões flanqueadoras estão sendo
encomendados e está sendo caracterizada a reação de PCR a ser
utilizada no estudo genético de populações desses peixes.
Crescimento populacional
Maior demanda de energia elétrica
Construção de represas
 Biblioteca Genômica
Interrupção de vias migratórias
 Isolamento dos clones
 Hibridização
 Sequenciamento
Resumo da técnica de montagem de biblioteca genômica
Corte do DNA total com Sau3A
Escolha da enzima apropriada
para a montagem da biblioteca
Sítio de corte da enzima utilizada
deixando extremidades coesivas
Mapa do vetor utilizado
Divisão das frações
da biblioteca
Técnica de transformação
bacteriana utilizada
(eletroporação)
Hibridização com sondas radioativas
Isolamento dos clones da biblioteca seguido de PCR ou
mini-prep para a posterior aplicação na membrana
Oligonucleotídeos utilizados
como sonda: CA, TC, CTT,
ACGA, TA, GGA, AAAG,TATC
Uma das membranas utilizadas.
Pode-se perceber que os clones
foram aplicados em duplicata.
Equipamento de
Sequenciamento
automático utilizado
Seqüência de um dos microsatélites encontrados
Seqüência de outro dos microsatélites encontrados
 PCR dos loci de microsatélite de cada indivíduo.
 Gel de poliacrilamida dos produtos de PCR
 Montagem de tabela com nº e freqüência de MS.
 Cálculo da heterozigosidade observada e esperada.
 Definição da distância genética e fluxo gênico entre as populações.
 Verificação da necessidade de construção
de mecanismos de
transposição.
 Teste de paternidade
 Novos sequenciamentos
 Coleta de peixes