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MSc in Biochemistry
Dissertation Project – 2nd Cycle
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No.
Supervisor(s): Sofia Pauleta e Isabel Moura
Supervisor(s) email address: Sofia Pauleta ([email protected]), Isabel Moura ([email protected])
Lab/Institution: Lab 617/613UCIBIO, Dep. Química, FCT-UNL
TITLE: A última etapa da desnitrificaçao - Reactividade do sítio catalítico da redutase do óxido nitroso
BACKGROUND
As práticas industriais e a agricultura duplicaram a velocidade intrinseca de fixação de azoto
no último século com consequências drásticas, incluindo um aumento do N2O atmosférico. O
N2O é um gás que provoca um elevado efeito de estufa e contribui também para a destruição
da camada de ozono, sendo a sua produção na grande maioria devido à actividade
microbiana.
O N2O existente na atmosfera tem sido atribuído principalmente à actividade de bactérias
desnitrificantes que não possuem o gene nosZ (que codifica para a reductase do óxido
nitroso), o sistema enzimático que cataliza a redução do N2O a N2, e quando o pH do meio
ambiente se torna acidico. Assim, é imperativo compreender o mecanismo pelo qual o pH
afecta a enzima reductase do óxido nitroso, cuja a actividade in vitro não é afectada a baixo
pH.
OBJECTIVES AND PROJECT DESCRIPTION
Assim, o objectivo deste trabalho é isolar a enzima N2OR de Marinobacter
hydrocarbonoclasticus de crescimentos realizados em biofermentadores a differentes pHs
(6.5, 7.5 e 8.5).
Tarefa 1 – Crescimento de Marinobacter hydrocarbonoclasticus em Biofermentador
Crescimento da bactérias em condições desnitrificans com baixa tensão de oxigénio e na
presença de nitrato.
Tarefa 2 - Purificação da N2OR de Marinobacter hydrocarbonoclasticus e seu parceiro redox
Usar técnicas cromatográficas para isolar a enzima e o seu dador de electrões fisiológico na
ausência de oxigénio (câmara de luvas).
Tarefa 3 – Caracterização cinética e espectroscópica da N2OR
PROJECT DESCRIPTION
Caracterização espectroscópica e actividade catalítica da N2OR isolada dos crescimentos
realizados a diferentes pHs.
Metodologias
Purificação de proteína (diferentes técnicas cromatográficas em FPLC, electroforese em gel).
Espectroscopia de UV-visível, EPR. Cinética de estado estacionário. Electroquímica. Métodos
de caracterização bioquímica (massa molecular, ponto isoeléctrico, conteúdo em metais,
actividade específica). Utilização de câmara de luvas.
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MSc in Biochemistry
Dissertation Project – 2nd Cycle
TIMELINE (use fill tool for the cells)
1. Regulador da Transcrição
Month 1
Month 2
Month 3
Month 4
Month 5
Month 6
Month 7
Month 8
Month 9
Month 10
Task 1
Task 2
Task 3
Thesis
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