Análise por RT-PCR da expressão de um gene de tiorredoxina h de

51º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 51º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2005
Hotel Monte Real • Águas de Lindóia • São Paulo • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-05-4
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palavras-chave: cana-de-açúcar, tiorredoxina, RT-PCR
Dantas, LBB; Barbosa, AE, Cabral, TS; Medeiros, ALM; Rabêlo, LMA; Marinho, P
Departamento de Biologia Celular e Genética da UFRN.
Análise por RT-PCR da expressão de um
gene de tiorredoxina h de cana-de-açúcar
Todos os organismos possuem genes que codificam tiorredoxinas, proteínas componentes de um sistema
que atua na manutenção do estado redox no meio intracelular, além de regular a atividade de proteínas
alvo. O mais complexo sistema tiorredoxina é encontrado nas plantas. Este sistema compreende
tiorredoxinas cloroplásticas (f, m, x e y), citoplasmáticas (h) e tiorredoxinas mitocondriais (o). A
realização do transcriptoma da cana-de-açúcar pelo projeto SUCEST disponibilizou vários clusters
potencialmente codificantes de tiorredoxinas. Alguns desses clusters apresentam, in silico, expressão
tecido-específica. O cluster SCAGFL8013B02.g, correspondente a uma tiorredoxina h e representado
por um único “read”, foi selecionado para análise por RT-PCR. Amostras de RNAs de folhas adultas e
jovens, meristema apical, raiz, brotos laterais, inflorescência com semente e flor não-fecundada foram
extraídas utilizando kits específicos (Promega). 2 µg de RNA de cada tecido foram usados nas reações
de RT-PCR empregando 10 unidades da transcriptase reversa AMV (Promega). O cDNA produzido
foi utilizado para amplificações de PCR. A escolha dos oligonucleotídeos específicos para a amplificação
foi feita com o programa Primer3 (http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi )
utilizando a seqüência do cluster presente no transcriptoma e disponível no SUCEST (http://sucest.
lad.dcc.unicamp.br/en/). As reações de PCR amplificaram fragmentos constituindo uma banda única
de 133pb para todos os tecidos analisados. A intensidade das bandas observada para as diferentes
amostras sugere que há uma expressão diferencial. Tecidos jovens contendo células em proliferação
parecem expressar níveis de transcritos de tiorredoxina mais abundantes, como por exemplo os de
meristema apical e de flor não fecundada. No caso específico deste cluster, representado por um “read”
no transcriptoma como sendo detectado apenas em uma biblioteca de flor, os resultados de RT-PCR
apontam para uma expressão menos específica, como é o caso de outras tiorredoxinas estudadas.
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