Estudo dirigido: Morte Celular Arquivo

FACULDADE DE MEDICINA DE RIBEIRÃO PRETO-USP
BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR
PROFA. DRA. ENILZA MARIA ESPREAFICO
TURMA CB 2015
AULA: T49 MORTE CELULAR PROGRAMADA
1) Ordene os eventos característicos da apoptose desencadeada pela via intrínseca:
Formação de protrusões na membrana plasmática (blebbing) ____
Perda da característica de assimetria da bicamada lipídica da membrana plasmática ____
Perda de adesão celular ____
Liberação de citocromo c ____
Ativação de pró-caspase 3 _______
Fragmentação do DNA nuclear ____
Formação de corpos apoptóticos _____
Fagocitose dos corpos apoptóticos por macrófagos ou células vizinhas______
Formação de apoptossomos ______
Ativação de pró-caspase 9 _______
2) Sobre a morte celular programada, assinale V para as afirmações verdadeiras e F para
as falsas. Corrija as afirmações falsas.
(
) Ocorre em todos os organismos multicelulares
(
) Evento característico de situações patológicas
(
) A elevada conservação estrutural de genes envolvidos neste processo entre organismos
filogeneticamente distantes sugere uma alta pressão seletiva e um papel essencial desse processo
(
) Má regulação desse tipo morte leva a tumorigênese, doenças degenerativas ou doenças
auto-imunes
(
) Morte celular acidental caracterizada por desequilíbrio osmótico e inchaço celular,
culminando no rompimento da célula e liberação do conteúdo celular para o meio extracelular,
provocando inflamação.
(
) Nenhum programa genético é ativado neste processo.
(
) Células são fagocitadas por vizinhas ou fagócitos, não há processo inflamatório.
( ) Durante a morte celular programada a membrana plasmática é rompida e o conteúdo celular
extravasado.
(
) Pode promover a eliminação de órgãos ou tecidos inteiros.
(
) Na ausência de sinais de sobrevivência, o destino automático de uma célula em um
organismo multicelular é a morte.
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( ) A apoptose desencadeada por via intrínseca é iniciada pela ação das proteínas Bcl2/Bcl-xL
e proteínas BH4 only, membros pró-aptoptóticos da família Bcl2.
( ) O controle das populações celulares e homeostase tecidual de um organismo depende do
predomínio constante dos membros anti-apoptóticos da família de proteínas Bcl2 sobre os próapoptóticos.
( ) Caspases constituem uma família de fosfatases.
( ) As caspases são sintetizadas na forma de precursores inativos e requerem fosforilação para
serem ativadas.
( ) A p53 é um oncogene, que age como repressor proteolítico de genes Cdks e de genes antiapoptóticos, promovendo, assim, o avanço no ciclo celular e a sobrevivência celular em resposta
a danos no DNA.
( ) Duas principais vias de transdução de sinais são responsáveis por ativar o processo de
apoptose.
( ) A via extrínseca é desencadeada apenas pela ligação de um ligante presente na superfície
de um linfócito killer ao seu receptor na superfície da célula alvo.
( ) As caspases são proteases que contêm um Asp em seu sítio ativo e clivam seus substratos
em um resíduo de Cisteína.
(
) Caspases 1, 4 e 5 são envolvidas em apoptose no sistema imune.
(
) Caspases 2, 8, 9 e 10 são iniciadoras.
(
) Caspases 3, 6 e 7 são executoras (ou efetoras).
(
) Pró-caspases efetoras são aquelas que possuem um domínio de recrutamento de caspases
(CARD).
( ) As pró-caspases iniciadoras são aquelas capazes de se complexar com proteínas adaptadoras
formando os complexos de ativação DISC ou o apoptossomo.
(
) Apaf1 é uma proteína adaptadora que se liga a citocromo c formando um complexo
heptamérico, o qual é inativo.
3) Os eventos descritos abaixo são característicos de um dos dois tipos comuns de morte
celular: necrose (N) ou apoptose (A). Classifique-os de acordo.
___A conservação de genes envolvidos neste processo em organismos distintos sugere uma alta
pressão seletiva para manutenção do mesmo
___Má regulação desse processo leva a tumorigênese, doenças degenerativas e doenças autoimunes
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___Morte celular acidental caracterizada por desequilíbrio osmótico, inchaço celular
culminando no rompimento da célula. Liberação do conteúdo celular para o meio extracelular
provoca inflamação.
___Nenhum programa genético é ativado neste processo
___Células são fagocitadas por vizinhas ou fagócitos, não há processo inflamatório.
___Fragmentação do DNA e fragmentação da célula sem ruptura da membrana plasmática.
___Pode promover a eliminação de órgãos ou tecidos inteiros
4) Relacione as colunas:
(1) via intrínseca
(2) via extrínseca
( ) recruta pró-caspase 9
( ) proteínas Bax e Bak
( ) liberação do citocromo c no
( ) ativação de Fas pelo ligante de
citosol
Fas
( ) Smac/diablo
( ) interação de citocromo-c com Apaf1
( ) receptores do fator de necrose tumoral
( ) recruta as pró-caspases 8 ou 10
( ) formação do apoptossomo
( ) formação do complexo DISC
( ) receptor de morte da família dos receptores do fator de
necrose tumoral (TNF)
( ) liberação de proteínas mitocondriais
( ) suprimida por ação de receptores decoy ou da proteína FLIP
( ) suprimida por proteínas anti-apoptóticas da família das proteínas Bcl2
5) Considerando a ação conjunta da apoptose e proliferação utilize os termos: Neoplasia,
Distrofia e Homeostase para caracterizar as seguintes situações:
a) Proliferação aumentada X Apoptose normal ________________________
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b) Proliferação normal X Apoptose normal ___________________________
c) Proliferação normal X Apoptose aumentada ________________________
d) Proliferação normal X Apoptose reduzida __________________________
e) Proliferação reduzida X Apoptose normal __________________________
6) Cite o nome de duas proteínas que inibem a ativação da via intrínseca e de duas que
funcionam inibindo a via extrínseca.
7) Discuta o papel de uma classe de proteínas que controlam apoptose agindo diretamente sobre
as caspases e como a função delas pode ser neutralizada.
8) A apoptose poder ser inibida em qual das seguintes situações?
a) a proteína Bid é clivada por caspase-8
b) a proteína Bad inativa genes responsáveis por codificar proteínas regulatórias
c) a proteína Blc2 é produzida em excesso (superexpressa)
d) aumenta-se a expressão de proteínas da família BH3 only como a Bim
9) Descreva como ocorre a ativação da via intrínseca e da via extrínseca.
10) Como ocorre a formação do apoptossomo?
11) Proteínas virais do HPV (vírus do papiloma humano) sequestram Retinoblastoma e p53,
impedindo que estas exerçam suas funções normais. Cite as funções moleculares normais dessas
duas proteínas:
p53:
Retinoblastoma:
- Considerando o efeito dessas proteínas virais sobre a célula hospedeira, como elas poderiam ser
classificadas?
a)
Pró-apoptóticas e anti-proliferativas
b)
Pró-sobrevivência e pró-proliferativas
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12) Observe as imagens apresentadas e dê sua interpretação sobre o fenômeno evidenciado em
cada uma delas?
A
A
B
B
C
C
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13) As imagens apresentadas a seguir ilustram os resultados obtidos com o estudo de
camundongos transgênicos para duas proteínas da superfamília da Bcl2. O genótipo dos
camundongos é indicado nas imagens e no gráfico, sendo que ‘wt’ se refere ao genótipo tiposelvagem (normal). Analise as ilustrações e responda:
a) Você concorda com a seguinte interpretação? Justifique.
--a falta de função da proteína Bcl2 acarreta acentuada redução no crescimento celular durante
o desenvolvimento pré e pós-natal resultando em animais que têm quase ¼ do tamanho normal.
b) Apresente sua interpretação para os resultados.
O genótipo dos camundongos para os genes Bcl-2 e Bim está indicado na figura.
wt = tipo selvagem (+/+), mutação nula (-/-), heterozigoto (+/-)
Semanas pós-natal= 4
Weight (peso); Age (idade em semanas - wk)
Semanas pós-natal= 8
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14) a) Os componentes da via intrínseca foram dissecados através da obtenção de mutantes de C.
elegans com deficiência em morte celular durante o desenvolvimento, com exceção do citocromo c,
para o qual no decorrer desses estudos, os pesquisadores nunca encontraram uma mutação. Por
que?
b) Hao et al. (Cell 121: 579-591, 2005) descreveram os fenótipos teciduais de camundongos
transgênicos expressando citocromo c mutado (K72A). Qual o objetivo dos pesquisadores e quais
foram as considerações e hipótese deles quanto a escolha da abordagem utilizada. Do ponto de
vista molecular, como você explica os fenótipo observado?
15) Para dissecar a ordem dos eventos na via intrínseca, pesquisadores decidem microinjetar citocromo c
purificado, solúvel, no citoplasma de uma célula selvagem e de uma célula nula para Bax/Bak. Você
espera que uma, ambas ou nenhuma delas entre em apoptose?
16) Vídeo microscopia mostra a localização celular de citocromo c em fusão com GFP. Selecione
um modelo que melhor se ajusta aos resultados observados e justifique.
1 -As células liberam o citocromo c lentamente ao longo do período após irradiação.
2 - As células liberam o citocromo c rapidamente, mas diferentes células disparam o evento de
liberação, em momentos diferentes.
(A) As células foram observadas durante 8 minutos, 10 horas após terem sido submetidas a
radiação ultravioleta.
(B) As células foram observadas por 6 min, 17 horas após irradiação.
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