Caracterização Funcional de Alterações na Região Promotora do

56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Caracterização Funcional de Alterações na Região
Promotora do Gene BRCA1 em Pacientes com Câncer
de Mama Hereditário
Fernandes, LR1,2; Costa , ECB2; Moreira MAM1
Divisão de Genética, Coordenação de Pesquisa, Instituto Nacional de Câncer
Departamento de Genética, Instituto de Biologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro
[email protected]
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Palavras-chave: Câncer de mama hereditário; BRCA1; Região Promotora; 5’UTR; Regulação da transcrição e tradução.
Mutações germinativas no gene BRCA1 podem ser identificadas por sequenciamento direto em aproximadamente
64% das famílias que apresentam síndrome de predisposição ao câncer de mama e/ou ovário. Outros fatores
associados ao desenvolvimento do câncer de mama e/ou ovário hereditários são alterações que não afetam a função
do gene BRCA1, mas sua expressão. A região promotora do gene BRCA1 possui dois promotores, promotor Alfa e
promotor Beta, além de dois primeiros éxons alternativos, denominados 1A (5’UTR-a) e 1B (5’UTR-b), que codificam
regiões que são transcritas mas não são traduzidas. A estrutura da região 5’UTR-b do gene BRCA1 revela mecanismos
potenciais a regulação de sua expressão. Outro elemento capaz de regular a expressão de BRCA1 é o estrogênio,
principalmente através de Erα. A relação entre as vias de BRCA1 e ERα forma uma intrincada rede envolvida
na proliferação celular e estabilidade genômica, mantendo um balanço entre dois efeitos opostos: oncogênico e
supressor de tumor. Recentemente foram descritas assinaturas ou perfis de expressão gênica com valor clínico
para o prognóstico adequado ou para a caracterização preditiva de pacientes ou de tumores. Apesar do padrão de
expressão de BRCA1 já ter sido proposto como um novo e útil marcador de prognóstico em casos câncer de mama
esporádico, nenhuma alteração na região promotora desse gene que afetasse seu padrão de expressão foi descrita em
casos de câncer de mama hereditário. O objetivo desse estudo é a avaliação da influência de variações na sequência
da região promotora de BRCA1 na transcrição e tradução de genes repórteres em linhagem celular eucariótica. Para
isso, as regiões promotoras e UTRs variantes, assim como as selvagens, foram clonadas em vetor pGL3-Basic ou
pEGFP-N1. Os plasmídeos recombinantes foram transfectados em linhagem celular MCF7, na presença e ausência
de estrogênio. A análise do perfil de expressão dos transfectados com os plasmídeos recombinantes contendo
as 5’UTRs (pEGFP-N1) foram analisados através de citometria de fluxo. Já os transfectados com os plasmídeos
contendo as regiões promotoras (pGL3-Basic) foram analisados através de ensaios de bioluminescências. Ambos
transfectados foram analisados através de PCR quantitativo. Através desses ensaios observamos que o estrogênio
é capaz de estimular a expressão de BRCA1 através da regulação positiva da transcrição e não da tradução. Além
disso, a tradução de BRCA1 pode ser inibida pela 5’UTR-b, de forma independente da ativação de sua transcrição.
Por fim, reiteramos que a regulação da expressão de BRCA1 ocorre tanto na transcrição e quanto na tradução e
que o transcrito contendo 5’UTR-a apresenta tradução três vezes mais eficiente que o contendo 5’UTR-b in vivo.
Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERJ, Convênio INCA-FIOCRUZ e MS.