Expressão heteróloga do gene VuHSP 17.7 em Escherichia coli

55º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 55º Congresso Brasileiro de Genética • 30 de agosto a 02 de setembro de 2009
Centro de Convenções do Hotel Monte Real Resort • Águas de Lindóia • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Expressão heteróloga do gene VuHSP 17.7 em
Escherichia coli submetida ao estresse térmico
Soares, CP1; Vidal, MS 2;Simões-Araújo, JL2
Mestrando em Biotecnologia Vegetal- PBV, Universidade Federal do Rio de Janeiro- UFRJ/Embrapa Agrobiologia.
Laboratório de Genética e Bioquímica -Embrapa Agrobiologia- CNPAB
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Palavras-chave: Expressão em Bactéria; HSP; tolerância ao calor.
A capacidade de tolerar altas temperaturas é um fenômeno complexo e controlado por diversos mecanismos, no
entanto, diversas observações indicam que a expressão de genes específicos pode conferir termotolerância em
diferentes organismos. A família das proteínas de choque térmico HSPs (Heat Shock Proteins) tem sido relacionada
com a tolerância ao estresse térmico em diversas espécies, seja eucarionte ou procarionte. O caupi ou feijão-decorda (Vigna unguiculata) é uma espécie de leguminosa cultivada predominantemente em regiões semi-áridas
sendo capaz de suportar o estresse térmico comum nestas regiões. Consequentemente, o caupi tornou-se uma fonte
importante de genes de tolerância a estresse térmico. Em trabalho anterior foi isolado e caracterizado um gene
de caupi, denominado VuHSP17.7 pertencente a família das HSPs, cujo os níveis de expressão são extremamente
alterados após exposição da planta a altas temperaturas. O gene VuHSP17.7 envolvido na tolerância ao choque
térmico, foi clonado no vetor de expressão pDEST17 através do sistema Gateway, e empregado na transformação
de Escherichia coli BL21 DE3(pLys) (Novagen). Com objetivo de analisar a resposta ao estresse térmico, células de
Escherichia coli transformadas foram selecionadas através do cultivo em meio LB contendo antibiótico ampicilina.
Clones contendo os genes de interesse e o controle, foram crescidas em condições normais a 37ºC durante duas
horas e submetidas ao choque térmico de 50ºC por duas horas. Alíquotas das culturas foram coletadas nos tempos
30, 60 e 120 minutos após o choque térmico, diluídas seriadamente e plaqueadas em meio LB sólido contendo
antibiótico ampicilina 100 μg/ml e clorafenicol 12,5 μg/ml para contagem do número de células viavéis(UFC).
Os resultados preliminares demonstram que a expressão heteróloga do gene VuHSP17.7 contribui de forma
significativa na proteção e estabilidade das células de E. coli quando submetida ao estresse térmico de 50°C.
Apoio Financeiro: FAPERJ e CAPES.