Avaliação microbiológica, fisíco-química de águas minerais

http://dx.doi.org/10.5902/223611709961
Revista do Centro do Ciências Naturais e Exatas - UFSM, Santa Maria
Revista Eletronica em Gestão, Educação e Tecnologia Ambiental - REGET
e-ISSN 2236 1170 - V. 18 n. 1 Abr. 2014, p. 7 - 13
Avaliação microbiológica, fisíco-química de águas minerais comercializadas
em Vitória da Conquista
Microbiological, physical and chemical assessment of mineral waters sold in vitória da Conquista
Isabel Celeste Caires Pereira Gusmão1
Bióloga, Faculdade Independente do Nordeste, Vitória da Conquista, Brasil
1
Resumo
Com a dúvida sobre a qualidade da água de abastecimento público, o cidadão passou a utilizar a água mineral com maior intensidade.
O objetivo desta pesquisa foi avaliar aspectos de qualidade microbiológica em amostras de água mineral natural, em garrafas individuais
de duas marcas comercializadas na cidade de Vitória da Conquista-Ba. Foram utilizadas dez amostras provenientes de duas marcas. As
amostras foram adquiridas aleatoriamente, em épocas e estabelecimentos diferentes para que fossem originadas de lotes diversos. Para
análise de coliformes totais e coliformes fecais/E. coli utilizou-se a técnica (NMP) determinação de número mais provável. Para contagem
de bactérias heterotróficas, foi utilizada a técnica de cultivo em profundidade. Todas as amostras de todas as marcas (100%) apresentaram
ausência de coliformes fecais/E.coli sete amostras (70%) das duas marcas apresentaram contagens acima de 500 UFC/mL para bactérias
heterotróficas apresentando um desacordo segundo a legislação brasileira para águas minerais que estabelece o limite de 500 UFC/mL para
água de consumo humano proveniente de sistemas de abastecimento público.
Palavras chave: Água mineral, contaminação bacteriana, coliformes.
Abstract
With the doubt on the quality of the water of public supplying, the citizen started to use the mineral water with bigger intensity. The objective of this research was to evaluate aspects of microbiological quality in natural mineral water samples, in individual bottles of two marks
commercialized in the city of Vitória da Conquista. Ten samples proceeding from two marks had been used. The samples had been acquired
randomly, at different times and establishments so that they were originated from diverse lots. For analysis of coliformes total and coliformes fecais/E. coli used it technique (NMP) determination of most likely number. For counting of heterotróficas bacteria, the technique of
culture in depth was used. All the samples of all the marks (100%) had presented absence of coliformes fecais/E.coli seven samples (70%)
of the two marks had presented 500 countings above of UFC/mL for heterotróficas bacteria presenting a disagreement in accordance with
the Brazilian legislation for mineral waters that the limit of 500 establishes UFC/mL for water of human consumption proceeding from
systems of public supplying.
Keywords: Mineral water, bacterial contamination, coliformes.
Recebido em: 10.10.13 Aceito em:13.12.13
8
GUSMÃO
1 INTRODUÇÃO
A água constitui um dos elementos fundamentais para a existência do ser humano. Em seu
estado natural é um dos componentes de maior pureza que se conhece e, atualmente, torna-se difícil
encontrar uma fonte de água doce que não tenha suas características alteradas.
A água contém uma série de micro-organismos, alguns naturais do ecossistema aquático e outros
micro-organismos transitórios, provenientes do solo e de dejetos industriais e domésticos como, por
exemplo, Clostrídios, Pseudomonas aeruginosa, Enterococos (MACÊDO, 2004).
Para a avaliação das condições de potabilidade de uma água utilizam-se bactérias do grupo
coliforme, que atuam como indicadores de poluição fecal, pois estão sempre presentes no trato intestinal humano e de outros animais de sangue quente, sendo eliminadas em grande número pelas fezes. A
presença de coliformes na água indica poluição com o risco potencial da presença de micro-organismos
patogênicos e sua ausência é evidência de uma água bacteriologicamente potável, uma vez que são
mais resistentes na água que as bactérias patogênicas de origem intestinal.
A água mineral natural, geralmente, apresenta excelente qualidade microbiológica, uma vez
que, devido ás características naturais dos aquíferos, ela permanece protegida de praticamente todos
os riscos de poluição. De acordo com a Organização Mundial da Saúde, cerca de 80% de todas as
doenças que acometem os países em desenvolvimento provêm da água de má qualidade. As doenças de veiculação hídrica, como febre tifóide, cólera, salmonelose, shiguelose, poliomielite, hepatite
A, verminoses, são predominantemente resultantes do ciclo de contaminação fecal/oral e têm sido
responsáveis por vários surtos epidêmicos, representando causa de elevada taxa de mortalidade em
indivíduos com baixa resistência imunológica (Freitas et al,2001).
Tendo em vista todas essas evidências de contaminação, o presente trabalho tem como objetivo
avaliar a qualidade microbiológica da água quanto à presença de coliformes totais e fecais, Clostridios
Sulfito Redutores, Enterecocos e Pseudomonas aeruginosa bem como o estudo das condições físicoquímica de duas marcas de águas minerais comercializadas na cidade de Vitória da Conquista, Bahia.
2 METODOLOGIA
2.1 Amostragem
Foram utilizadas 20 amostras de água mineral natural de 20 litros, embaladas em garrafas para
uso individual, provenientes na cidade de Vitória da Conquista – BA. As amostras foram adquiridas
em vários estabelecimentos no comércio da cidade de, forma aleatória e em períodos diferentes, sendo
de 2 marcas comercializadas sem a preocupação com a data de embalagem, mas observando-se o
prazo de validade simulando as condições do consumidor. As amostras foram retiradas diretamente
dos garrafões, adequadamente higienizados, tomando-se cuidados para não contaminá-las e foram
transportadas diretamente ao laboratório de Microbiologia da FAINOR dentro de uma caixa térmica.
As análises foram realizadas mensalmente. O período de estudo se deu de fevereiro a junho de 2013.
2.2 Parâmetros
Os micro-organismos pesquisados são todos exigidos pela Resolução RDC N°275, de 22 de
setembro de 2005, do Ministério da Saúde exceto Clostrídeos Sulfito Redutores (NMP /100mL).
2.3 Análise microbiológica
As análises microbiológicas foram realizadas no Laboratório de Microbiologia da FAINOR.
Foram avaliados os seguintes parâmetros: coliformes totais, coliformes fecais/E.coli bactérias heterotróficas, Clostridios Sulfito Redutores, Enterecocos e Pseudomonas aeruginosa.
2.4 Determinação do número mais provável (NMP) de coliformes totais e coliformes termotolerantes.
Para a identificação da Escherichia coli, como indicador biológico, pode-se usar o Caldo EC,
para contagem por “Número Mais Provável” por mililitro (NMP/mL), que é seletivo para micro-organismos Gram negativos em função da presença de sais biliares. A incubação à temperatura de
45,5º C em banho-maria por 24 horas permite evidenciar a presença de coliformes fecais, pois eles
apresentam a capacidade de fermentação da lactose com produção de gás a temperaturas mais elevadas.
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Em seguida foram realizadas as diluições seriadas, retirando 01 mL da amostra e transferindo-o para um tubo de ensaio contendo 9 mL de solução salina 0,8% e, em seguida foi transferido 01 mL
(deste tubo) para outros tubos até completar as três diluições (10-1, 10-2 e 10-3), conforme a IN 62/
Mapa (Brasil, 2003).
Foi transferido 01 mL de cada tubo de cada diluição para cada um dos três tubos contendo 09
mL de caldo Lactosado EC, adicionado o tubo de Durhan (invertido) com função de coletar o gás
produzido durante a fermentação (Macêdo, 2004). Por esta técnica se pode obter informações sobre
a população presuntiva de coliformes (teste presuntivo); sobre a população real de coliformes (teste
confirmativo) e sobre a população de coliformes de origem fecal (Macêdo, 2004) .
Como citado, o ensaio se processa através de 2 etapas (ensaio presuntivo e confirmativo) de
realização obrigatória para todos os tipos de amostras de água , as quais são complementadas, quando
indicado, por uma terceira etapa (ensaio completo). A densidade de coliformes fecais é obtida a partir
de um ensaio específico, aplicado paralelamente ao teste para confirmação de coliformes totais.
2.5 Pesquisa de Clostrídios sulfito- redutores
Empregou-se nessa análise o Meio Reforçado para Clostrídios (Difco®) e incubação a 45ºC por
48 horas em jarra de anaerobiose contendo gerador de anaerobiose (Silva et al., 2005).
2.6 Pesquisa de Enterococos
Como teste presuntivo, eram inoculados volumes de 10ml da amostra a ser analisada em cada
tubo de uma serie de 10 tubos contendo Caldo Azida- dextrose em concentração dupla. Posteriormente,
incubavam os tubos a 35°C por 48 horas. A presença de Enterococos é indicada pela presença de gás,
retido nos tubos de Durhan. Os tubos positivos eram, então, confirmados por repicagem (com uma
alçada) em placas contendo Ágar m-enterococos. A presença de pequenas colônias rosadas confirmava
a contaminação por Enterococos.
2.7 Pesquisa de Pseudomonas aeruginosa
O NMP de P. aeruginosa foi realizado utilizando-se a técnica dos tubos múltiplos contendo
Caldo Asparagina, meio seletivo no qual a asparagina é a única fonte de carbono e nitrogênio disponível
para crescimento da bactéria, como citado por Cabrini e Gallo (2001). Os resultados positivos foram
repicados para uma placa de Ágar Cetrimide incubada a 35°C por 48h. O surgimento de coloração
esverdeada em toda a placa ou de colônias verde limão indicou resultado positivo para a presença de
Pseudomonas aeruginosa segundo Cabrini e Gallo (2001). Os resultados positivos foram repicados
para uma placa de Ágar Acetamida incubada a 35°C por 48h. O surgimento de coloração esverdeada
em toda a placa ou de colônias verde limão indicou resultado positivo para a presença de Pseudomonas As cepas positivas foram repicadas para placas de Ágar Leite e incubadas a 35°C por 48h para se
confirmar a presença de P. aeruginosa e observar a formação de um halo claro ao redor das colônias
e a produção de um pigmento verde, em seguida anotar o número de placas confirmadas e determinar
o número mais provável (NMP) de Pseudomonas aeruginosa na amostra utilizando uma tabela NMP
adequada.
2.8 Análise do pH
Foi utilizado para essa análise, o pHmetro da marca Quimis, modelo Q400A. O pH de cada
amostra foi verificado em triplicata com auxílio de pHmetro. O resultado obtido correspondeu à
média aritmética das três aferições, para cada amostra. Além do pH, foi analisado o cloro, dureza e
condutividade de cada amostra.
3 RESULTADOS E DISCUSSÕES
De acordo com a Tabela 1 verifica-se que todas as amostras das duas marcas (100%) atenderam
ao padrão para coliformes fecais/E.coli, ou seja, ausência deste grupo microbiano. Esses resultados
também foram observados nos estudos realizados por Cabrini e Gallo (2001); Coelho et al. (1998);
David, (1999); Eiroa et al. (1996); Nascimento,(2000); Reis et al. (2006); Sabioni e Silva (2006).
A enumeração de coliformes fecais/E. coli é importante, pois sua presença indica a possibiREGET - V. 18 n. 1 Abr. 2014, p. 7- 13
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GUSMÃO
lidade de ocorrência de outros micro-organismos patogênicos entéricos na água e a possibilidade de
contaminação fecal. Por outro lado, alguns sorotipos de E. coli são responsáveis por gastrenterites,
tendo a diarréia como o principal sintoma. (Santana, 2003).
Os valores de pH condutividade e bicarbonato apresentaram com uma pequena diferença
do exposto no rótulo. Os resultados para cloretos estavam acima dos valores apresentados no rótulo
enquanto que os parâmetros de cálcio, magnésio, potássio, sulfato e sódio estavam aquém dos valores
indicados nas embalagens. Os resultados do presente trabalho permitem concluir que: 65% das amostras
analisadas estavam em desacordo com os padrões microbiológicos legais apresentando contaminação
por bactérias heterotróficas sugerindo condições higiênicas- sanitárias deficientes (Tabela2).
Entretanto, resultado negativo de coliformes fecais não significa ausência de contaminação fecal,
porque esse resultado é influenciado pelo número e tamanho da amostra, sensibilidade da metodologia,
quantidade presente de coliformes, interação sinérgica com Pseudomonas aeruginosa, além de haver
cepas de Salmonella mais resistentes do que os coliformes (Santana, 2003).
Das duas marcas analisadas, 6 amostras (60%) apresentaram contagens elevadas (>500UFC/
mL) para bactérias heterotróficas (Tabela 1), estando em desacordo com o padrão utilizado como base
nesta pesquisa, que estabelece o limite de 500 UFC/mL para água de consumo humano proveniente
de sistemas de abastecimento público. Esses resultados positivos em 60% das amostras são superiores
aos encontrados por Cabrini e Gallo (2001) em 38% das amostras, Reis et al. (2006) em 20%; Sabioni
e Silva em 50% (2006)
A maioria das bactérias heterotróficas, geralmente, não é patogênica. Entretanto alguns membros desse grupo, incluindo Legionella spp., Micobacterium spp., Pseudomonas spp., Aeromonas spp.,
podem ser patógenos oportunistas segundo Reis et al. (2006)
Como as águas minerais engarrafadas são consumidas sem qualquer tratamento, contagens
elevadas de heterotróficos podem indicar a possível presença de patógenos, especialmente formas
resistentes a múltiplos antibióticos, o que pode representar sério risco a saúde de indivíduos imunocomprometidos (Jeena et al., 2006).
Os micro-organismos heterotróficos presentes na água, quando em grande número, além de
representarem um risco à saúde, podem ocasionar outros problemas, tais como: deterioração da qualidade da água, com desenvolvimento de odores e sabores desagradáveis e, ainda, formação de limo ou
películas. Estudos realizados revelaram que quando a contagem deste grupo aumenta até um nível de
500UFC/mL, a frequência na detecção de coliformes também aumenta; porém, quando a população
bacteriana excede a 1000UFC/mL, a frequência na detecção de coliformes decresce (Jena et al.,2006).
A maioria das amostras analisadas neste trabalho apresentou contagem de heterotróficos acima
de 1000UFC/mL, o que pode representar a inibição da detecção de coliformes e, consequentemente, a
possível presença de contaminação fecal e de enteropatógenos. A contagem de bactérias heterotróficas
em águas minerais deve ser realizada com o objetivo de avaliar as condições higiênico-sanitárias do
sistema industrial (Sabioni 2006).
Devido aos problemas causados pelas altas contagens de heterotróficos em água mineral, e para
se avaliar as condições higiênico-sanitárias do sistema industrial, seria interessante a inclusão desse
parâmetro na legislação brasileira para água mineral de forma a fornecer água mais segura para o
consumidor. No entanto, o fato da água mineral apresentar micro-organismos autóctones que variam
conforme a fonte e se multiplicam após o engarrafamento, dificulta o estabelecimento de limites.
De acordo com Morais e Costa (1990), as características das fontes influenciam a população
bacteriana das águas minerais. No entanto, limites sugeridos de 500 UFC/mL para água mineral são
problemáticos, já que a água de diferentes fontes terá diferentes quantidades de matéria orgânica.
Segundo Eiroa et al (1996) a primeira medida seria melhorar as condições higiênicas do pessoal,
das embalagens e tampas e dos equipamentos usados no processo de engarrafamento, com isso, além
de diminuir a quantidade de matéria orgânica que entra em contato com a água e assim possivelmente
reduzir a população dos micro-organismos autóctones, também evita-se contaminações. A multiplicação dos micro-organismos em água engarrafada se dá devido ao contato com compostos orgânicos,
que podem estar presentes em tubulações, reservatórios ou nas embalagens e tampas.
Das 20 amostras avaliadas, 13(65%) apresentaram-se contaminadas por bactérias heterotróficas
estando em desacordo com os padrões microbiológicos estabelecidos pela RDC 518/2004 Pseudomonas, E.coli, Enterococos e Clostrídios sulfito redutores não foram isolados em nenhuma das amostras.
(Tabela 1)
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Tabela 1 Ocorrência dos micro-organismos pesquisados nas 02 marcas de água mineral analisadas
Marcas
Coliformes
totais
Coliformes
fecais
Bactérias
heterotróficas
Enterococos
Paeruginosa
A
-
-
+
-
-
Clostridium
Sulfito
redutor
-
A
-
-
+
-
-
-
A
-
-
+
-
-
-
A
-
-
+
-
-
-
A
-
-
+
-
-
-
A
-
-
+
-
-
-
A
-
-
+
-
-
-
A
-
-
+
-
-
-
A
-
-
+
-
-
-
A
-
-
+
-
-
-
B
-
-
+
-
-
-
B
-
-
+
-
-
-
B
-
-
+
-
-
-
B
-
-
+
-
-
-
B
-
-
+
-
-
-
B
-
-
+
-
-
-
B
-
-
+
-
-
-
B
-
-
+
-
-
-
B
-
-
+
-
-
-
B
-
-
+
-
-
-
(+): presente; (-): ausente
Em relação à qualidade físico química, os diferentes tipos de águas minerais apresentam as
seguintes características: em relação à dureza, as amostras de água mineral apresentaram valores
menores de 50mg/L de CaCO3) ( Tabela 2).
Todas as amostras apresentaram qualidade satisfatória no que se refere à contaminação por
Enterococos,Clostridios sulfito-redutores e Pseudomonas aeruginosa.(Tabela1). Deve-se conduzir o
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processamento, embalagem e estocagem da água mineral sob rigorosas práticas higiênicas, de forma
a minimizar a contaminação microbiológica do produto.
Estudos realizados por Eiroa et al. (1996) em amostras de água mineral em temperatura ambiente,
encontraram um aumento da população dos micro-organismos heterotróficos nos primeiros 30 dias
de armazenamento para depois diminuir, de maneira irregular, e ficar aproximadamente constante até
completar 6 meses de observação. Uma medida para prevenir isso seria o armazenamento em baixas
temperaturas nos mercados e nas casas, o que diminuiria a multiplicação dos autóctones e impediria
a multiplicação dos patogênicos; também poderia ser utilizado o binômio tempo/temperatura, diminuindo a temperatura e o tempo de estocagem, podendo retardar a multiplicação microbiana.
Nos estudos feitos por Cabrini e Gallo (2001) foi observado que todas as amostras de 500 mL
apresentaram elevadas contagens de heterotróficos, o que sugere maiores cuidados com relação às
condições higiênicas das garrafas utilizadas, principalmente as de pequeno volume, a fim de assegurar
a boa qualidade do produto.
Para Coelho et al ( 1998) estudos têm mostrado que as bactérias geralmente ocorrem em maior
número nas garrafas plásticas do que nas de vidro, isso ocorre devido à característica do plástico em
permitir a passagem de O2. Os nutrientes liberados do plástico são também um possível contribuinte
para o aumento da multiplicação bacteriana na água (Rosenberg, 2003).
Rosemberg, (2003) concluíram que a principal causa das baixas contagens de colônias da mesma
água mineral em garrafas de vidro mecanicamente limpas diferenciando-se das garrafas plásticas, com
altas contagens de colônias, é o efeito bacteriostático dos agentes de limpeza residual. O uso de garrafas
de vidro pode ser uma alternativa para melhorar a qualidade das águas minerais.
Tabela 2- Análise físico - química na determinação da qualidade da água dos tipos A e B
Valores
da
pesquisa
AMOSTRAS
pH
Condutividade
Cloreto
Dureza
Cálcio
Magnésio
Potássio
Sódio
Alcalinidade
Total
Sulfato
A
B
Valores do
rótulo
A
5,8
5,2
4,87
4,33
29
80
50
79
39,8
61,5
8,82
13,15
18,3
19,1
-
-
0,025
0,075
0,161
0,311
0,05
0,075
1, 243
1,244
0
0
1,853
0,405
0,17
0,55
5,133
11
3,35
2,5
0
0
1,18
B
1,5
4 CONCLUSÕES
Constata-se, assim, que apesar dos parâmetros físico-químicos estarem dentro dos padrões de
potabilidade, necessita-se de uma reavaliação dos rótulos em relação às quantidades dos sais analisados
e que todas as amostras apresentaram ausência de crescimento microbiano.
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