Cloreto de cobalto induz parada do ciclo celular em G2/M e ativação

55º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 55º Congresso Brasileiro de Genética • 30 de agosto a 02 de setembro de 2009
Centro de Convenções do Hotel Monte Real Resort • Águas de Lindóia • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Cloreto de cobalto induz parada do ciclo celular em
G2/M e ativação de NF-κB em células leucêmicas
Baumont, AC 1,2; Freitas, MB2; Zanotto-Filho, A3; Delgado-Cañedo, A2; Roman, T1
Departamento de Genética, UFRGS
Laboratório de Cardiologia Molecular e Celular, Instituto de Cardiologia de Porto Alegre
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Centro de Estudos em Estresse Oxidativo, Departamento de Bioquímica, UFRGS
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Palavras-chave: hipóxia, cloreto de cobalto, leucemias, NF-kappaB, ciclo celular
A hipóxia é uma condição que, em diversas linhagens tumorais, pode causar alterações na expressão gênica que
contribuem para a progressão tumoral e potencial invasivo e metastático. No entanto, em outras linhagens tumorais,
poderia bloquear o ciclo celular e induzir apoptose e necrose. O Fator-1 induzível por hipóxia (HIF-1) é um importante
regulador da resposta celular à privação de oxigênio, modulando a expressão de genes pró-apoptóticos, como p53,
Ndrg-1, Bax e Fas, e/ou anti-apoptóticos, como Bcl-2. Outros fatores transcricionais, como o fator nuclear kappaB
(NF-κB), também demonstraram acionar respostas diretas ou indiretas à hipóxia. Recentemente, foi descrita uma
associação entre as espécies reativas de oxigênio (ROS) e esses fatores transcricionais. Nesse sentido, cloreto de
cobalto (CoCl2), um agente mimetizante das condições hipóxicas, que também parece aumentar a formação de
ROS, poderia intensificar a atividade de ambos fatores. Estudos recentes apontam para possível utilização do CoCl2
no tratamento de leucemias, porém seus efeitos em células leucêmicas ainda não foram elucidados. Assim, os
objetivos deste estudo foram investigar os efeitos da hipóxia mimetizada por CoCl2 na proliferação ou morte de
linhagens celulares leucêmicas, considerando as conseqüências sobre o ciclo celular; e investigar o papel do NF-κB
na mimetização de hipóxia e na relação entre hipóxia e geração de ROS. Três linhagens celulares leucêmicas foram
utilizadas: K562, derivada de leucemia mieloblástica crônica, U937, derivada de leucemia mieloblástica aguda, e
Jurkat, derivada de leucemia linfocítica aguda. As células foram tratadas com CoCl2 em concentrações crescentes
(10 μM a 500 μM) e diferentes tempos (12h, 24h e 48h). Avaliou-se a morte celular e apoptose através de marcação
com PI e Yopro-1. O ciclo celular foi analisado por citometria de fluxo, e a geração de ROS por fluorimetria. A
atividade de ligação ao DNA do NF-κB foi investigada por EMSA. Verificamos que a mimetização de hipóxia
por CoCl2 inibe o crescimento celular e promove bloqueio do ciclo celular na transição G2/M nas três linhagens
celulares, mas desencadeia apoptose apenas nas linhagens U937 e Jurkat. Concomitantemente, a hipóxia por CoCl2
gera ROS nas três linhagens, confirmando a relação entre estresse oxidativo e hipóxia. Finalmente, a mimetização
de hipóxia aumenta a ligação do NF-κB ao DNA, evidenciando a participação desse fator transcricional nas
respostas celulares verificadas. Sugerimos que o NF-κB poderia atuar conjuntamente com o HIF-1 na modulação
da expressão gênica durante a hipóxia acarretando, direta ou indiretamente, bloqueio no ciclo celular em G2/M
em células leucêmicas.
Apoio financeiro: CAPES e FAPERGS