CAROLINA_FREGONESI_BARBOSA - FCFAR

CAROLINA FREGONESI BARBOSA
TÍTULO:
TRYPANOSOMA CRUZI: UTILIZAÇÃO DE CÉLULAS PERMEÁVEIS NA
REAÇÃO DE TRANS-SPLICING IN VITRO COMO MODELO DE ESTUDO DA
AÇÃO DE FÁRMAÇOS NO PROCESSAMENTO DOS RNAS MENSAGEIROS.
2005. 74p.
Data da defesa: 07/03/2005
RESUMO:
A doença de Chagas é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi que
possui como mecanismo de processamento dos seus mRNAs a reação de
trans-splicing, que envolve a excisão de íntrons e a união de éxons de dois
transcritos independentes; um transcrito curto spliced leader (SL RNA) é transspliceado ao pré-mRNA aceptor, originando o mRNA maduro. No presente
trabalho utilizamos células permeáveis de formas epimastigotas de
Trypanosoma cruzi (cepas Y, NCS e Bolívia) como modelo de estudo da
interferência de fármacos no processamento dos mRNAs. Assim, inicialmente,
realizou-se uma reação de PCR de DNA genômico das cepas Y, BOL e NCS
para amplificação da seqüência SL e clonagem em vetor pGEM-T de tal modo
que, após transcrição (in vitro) de tais clones, foram obtidos SL RNA antisentido a serem utilizados na reação de proteção com RNases A e T1 para
análise do processamento dos mRNAs com as células permeáveis de cada
uma das cepas. As células do parasita foram permeabilizadas com lisolecitina e
tratadas com o potencial fármaco hidroximetilnitrofural (NFOH), um nitrofurano
com capacidade de inibir a tripanotiona redutase, uma importante enzima no
metabolismo antioxidante do T. cruzi. Dos experimentos realizados, observouse que aumentando a concentração do NFOH os RNAs recém-sintetizados
decaíram, sugerindo que este fármaco age no processamento dos RNAs dos
parasitas. O sistema de células permeáveis mostrou ser útil para o
entendimento da ação de fármacos tripanocidas, podendo ser utilizados na
triagem de outros fármacos potencialmente tripanocidas.