Investigação da sinalização mediada por Galectina-3 na

XXXV Semana da Química – Rio de Janeiro: Produzindo
Ciência há 450 anos
I Jornada Local do Programa Multicêntrico de
Pós-Graduação em Bioquímica e Biologia Molecular
Investigação da sinalização mediada por Galectina-3 na infecção pelo
Trypanosoma cruzi
Paiva, Cefas Augusto Medeiros; Chain, Michelle Oliveira; De-Melo, Luiz Dione Barbosa
[email protected]
Laboratório de Genética Molecular, Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Rio de Janeiro – IFRJ
Palavras-chave: Galectin-3, interação parasito-hospedeiro, Trypanosoma cruzi, doença de Chagas.
Introdução
Dr. Carlos Chagas identificou o agente etiológico da
doença de Chagas, o Trypanosoma cruzi, em 1909 [1].
Mais de 100 anos depois da descrição da doença,
ainda existem de 6 – 7 milhões de pessoal infectadas
pelo T. cruzi por todo o mundo (WHO) – por volta de
30% dos pacientes cronicamente infectados
desenvolvem alterações cardíacas e aproximadamente
10% desenvolvem alterações neurológicas, digestivas
ou mistas que necessitam de tratamentos específicos.
A
interação
parasita-hospedeiro
é dividida
classicamente em dois estágios. O estágio da adesão,
caracterizado pelo processo de reconhecimento e
sinalização, e o segundo estágio, de internalização que
que promove a ativação de uma série de vias
culminando na endocitose do parasito [2, 3, 4].
Durante este processo moléculas presentes na
superfície do parasito e das células do hospedeiro são
essenciais para a infecção e reinfecção. Dentro da
família das lectinas, a galectina-3 é a única isoforma
quimera e é expressa por diversos tecidos em
vertebrados. Essa proteína tem distribuição celular
ubiquitária e pode ser encontrado na matriz
extracelular, atuando de forma pleiotrópica em
funções associadas com a proliferação, controle do
ciclo celular, carcinogênese, reconhecimento de
patógenos, resposta imunológica e fagocitose [5].
Metodologia
Para a investigação da infecção in vivo, análises da
parasitemia utilizando a forma tripomastigota
sanguícola da cepa Y foram feitas em camundongos
C57Black/6 selvagens e knockout para galectina-3,
comparando também a taxa de mortalidade entre os
diferentes genótipos. O baço destes animais é coletado
e utilizado para aquisição de células esplênicas para
análises de perfil imunológico por citometria de fluxo.
Em adição, a técnica de PCR foi utilizada para gerar
os produtos de clonagem das formas mutadas de
galectina-3 S6A, S6D e CRD. Estes produtos foram
clonados no plasmídeo pJET e subclonados no pHIV-
puromicina para posterior transdução em células HeLa
e análise in vitro da infecção em isoformas mutadas
de Galectina com apoptose [5].
Resultados e Discussão ou Resultados
Esperados
Camundongos C57Black/6J knockout para galectina-3
apresentaram uma maior sobrevida e menor
parasitemia quando comparados aos camundongos
selvagens. O que demonstra que a proteína em
questão está de fato envolvida em alguma via
relacionada com o sucesso da infecção pelo T. cruzi.
Algumas análises ainda precisam ser feitas para se
obter resultados conclusivos a respeito da comparação
do perfil imune entre as células esplênicas dos animais
infectados comparados com os não infectados e entre
os genótipos no que diz respeito à mobilização de
linfócitos T CD4, CD8, células NK e T regulatórios.
Além disso, os produtos de PCR foram clonados e
subclonados com sucesso e no momento as células
HeLa já foram transduzidas para expressar as
isoformas mutadas S6A, S6D e CRD. Essas
linhagens serão fundamentais para o estudo da
atuação e co-localização da galectina-3 ao longo do
processo de infecção pelo T. cruzi.
Referências
[1] CHAGAS, C. Nova tripanossomíase humana: Estudos sobre a
morfologia e o ciclo evolutivo do Schizotrypanum cruzi n. gen., n. sp.,
agente etiológico de nova entidade mórbida do homem Mem. Inst.
O swaldo Cruz , vol.1, p:159-218, 1909
[2] BARRIAS, E.M.; CARVALHO, T .M.U.; DE SOUZA, W.
Trypanosoma cruzi: entry into mammalian host cells and parasitophorous
vacuole formation. frontiers in IMMUNOLOGY. vol.4, p.1-10, 2013.
[3] DE SOUZA, W. Trypanosoma cruzi-Host Cell Interaction.Front
Immunol.eCollection vol.4;5, p.339, 2014.
[4] DE SOUZA, W.; DE CARVALHO, T.M.; BARRIAS, E.S. Review on
Trypanosoma cruzi: Host Cell Interaction. Int J Cell Biol. vol.2010, 2010.
[5] DUMIC, J.; DABELIC, S.; FLOGEL, M. Galectin-3: an open-ended
story. Biochim Biophys Acta.vol.1760 (4), p.616-635, 2006.
Agradecimentos: IFRJ, CNPq, FAPERJ.
Instituto Federal do Rio de Janeiro / Campus Rio de Janeiro – 19 a 24 de Outubro de 2015