Quinureninase de Trypanosoma cruzi: evidência de uma via

54º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 54º Congresso Brasileiro de Genética • 16 a 19 de setembro de 2008
Bahia Othon Palace Hotel • Salvador • BA • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
Quinureninase de Trypanosoma cruzi:
evidência de uma via alternativa para
o catabolismo do triptofano
Vernal, J1; Ecco, G1; Razzera, G2; Tavares, C1; Serpa, VI1; Krieger, MA3; Goldenberg, S3; Terenzi, H1
1
Laboratório de Expressão Gênica, Departamento de Bioquímica, Univesidade Federal de Santa Catarina, Florianópolis, Santa Catarina, Brasil
Centro Nacional de Ressonância Magnética Nuclear – Jiri Jonas, Departamento de Bioquímica Médica, ICB/CCS/UFRJ, Rio de Janeiro, RJ, Brasil
3
Instituto de Biologia Molecular do Paraná, IBMP, Curitiba, Paraná, Brasil
[email protected]; [email protected]
2
Palavras-chave: quinureninase, via da quinurenina, Trypanosoma cruzi, doença de Chagas
O Trypanosoma cruzi é um protozoário flagelado, pertencente à Ordem Kinetoplastida. Ele é o agente etiológico da doença
de Chagas, enfermidade ainda sem cura que atinge milhões de pessoas desde os Estados Unidos até o sul da América
do Sul. Esse parasita possui no seu genoma uma janela de leitura que codifica para uma possível enzima quinureninase.
A estrutura primária traduzida possui alta similaridade com as quinureninases de diversos outros organismos, como
Saccharomyces cerevisiae e Pseudomonas fluorescens. Essa enzima, dependente de piridoxal-5’-fosfato, tem um importante
papel no catabolismo do triptofano, participando da via da quinurenina. A quinureninase eucariótica catalisa a clivagem
hidrolítica da 3-hidroxi-L-quinurenina em ácido 3-hidroxiantranílico e L-alanina. Nesse trabalho, nós descrevemos a
expressão em Escherichia coli, purificação e caracterização inicial da estrutura e função da enzima quinureninase de T.
cruzi. Obtiveram-se com o procedimento de purificação utilizado (cromatografia de afinidade por metal imobilizado)
2.9 mg da proteína pura, partindo-se de um cultivo bacteriano de 500 ml. Os dados da espectrometria de massa
confirmaram a identidade dessa proteína. A massa molecular aparente da quinureninase nativa de T. cruzi foi estimada
por gel filtração, sugerindo que a proteína nativa é um dímero composto de duas subunidades similares. A quinureninase
de T. cruzi utiliza tanto a L-quinurenina quanto a 3-hidroxi-L-quinurenina como substratos, com atividades específicas
de 137.61 U mg-1 e 203.46 U mg-1, respectivamente. Foi estudada a estrutura secundária da enzima por dicroismo
circular. Os dados obtidos sugerem um conteúdo de α-hélice de 44% e de folha β de 5%, estando o restante da proteína
aleatoriamente enovelada. Esses resultados estão de acordo com a estrutura da quinureninase humana (PDB 2HZP).
No T. cruzi, foi demonstrado que as enzimas tirosina aminotransferase e desidrogenase de 2-hidroxiácidos aromáticos
são responsáveis pelo catabolismo de aminoácidos aromáticos. Os resultados obtidos neste trabalho sugerem que o T.
cruzi poderia também catabolizar o triptofano através de uma via alternativa, a via da quinurenina – processo envolvido
na biosíntese de novo de NAD+.
Apoio financeiro: CNPq, CAPES, MCT, FINEP e FAPESC.
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