CITOTOXICIDADE DA ZIDOVUDINA EM NEUTRÓFILOS Ana Cristina Colusso (IC-Voluntária), Deisy Alini Ruthes (IC-Voluntária ), Rubiana Mara Mainardes (co-orientador), Najeh Maissar Khalil (Orientador) e-mail: [email protected] Palavras-chave: AZT, neutrófilos, citotoxicidade. Resumo: A zidovudina (AZT) é um fármaco antiretroviral potente usado no tratamento da AIDS, Destaca-se na patogênese da AIDS a atuação das leucócitos polimorfonucleares (LPMN). A avaliação da viabilidade dessas células após a exposição ao AZT por 30 minutos foi feita pelo método de exclusão do azul de Trypan. Os resultados obtidos nas condições de ensaio não demonstraram ação efetiva do AZT sobre os LPMN. Introdução A síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) é uma enfermidade causada pelo retrovírus (vírus de RNA) HIV (Human immunodeficiency virus ) (Peçanha & Antunes, 2001). Uma vez no organismo humano o vírus destrói o sistema imune, que fica desabilitado à resistência a outros patógenos, tornado o portador altamente vulnerável a muitas infecções oportunistas e também ao câncer (Giammona et al., 1999). Os alvos para o tratamento do HIV estão em seu ciclo de replicação. A transcriptase reversa é uma enzima de função determinante no ciclo replicativo viral, mas que não possui enzima análoga em humanos, sendo um excelente ponto de ação farmacológica (Peçanha & Antunes, 2001) dentre os fármacos de ação sobre a enzima destaca-se a Zidovudina (AZT). O AZT foi o primeiro quimioterápico aprovado para uso clínico, sendo o fármaco mais utilizado, seja em combinação ou isoladamente. Entretanto, sua eficácia terapêutica é limitada por seus efeitos hematológicos tóxicos (Oh et al., 1998; Thomas & Panchagnula, 2003). Células do sistema imune desenvolvem um importante e papel na patogênese da AIDS, destacando-se os leucócitos polimorfonucleares (LPMN), responsáveis por inúmeros processos que envolvem morte celular por migração, quimiotaxia e aderência, seja por mecanismos dependentes ou independentes do oxigênio. (Castro et al., 2002). Materiais e Métodos Utilizaram-se ratos Wistar adultos, nos quais administro-se intraperitonealmente uma solução de glicogênio de ostra a 0.5% em NaCl 0,85% para promover migração de LPMN. O material foi então coletado e exposto as diferentes concentrações de AZT por 30 minutos. Para verificação da viabilidade celular usou-se o método de exclusão do azul de Trypan, onde as células que sofreram lesão na membrana celular adquirem coloração azul (devido a incorporação do corante), enquanto as viáveis não adquirem coloração. Essa visualização foi realizada com auxilio de microscópio ótico, onde foram contadas 200 células e feita a porcentagem das coradas. Resultados e Discussão A avaliação da viabilidade celular dos neutrófilos pelo método de azul de Trypan, baseia-se no fato de o corante só ser absorvido por células cuja membrana celular se desfez, quantificando assim o grau de lesão das células proporcionado pela exposição dessas a cada uma das concentrações da AZT. Tabela 1. Efeito de diferentes concentrações de AZT sobre neutrófilos, após incubação por 30 minutos e revelado o efeito citotóxico pelo corante azul de Trypan (n=4). [AZT] % células coradas Controle 0,2 mg/ml 0,1 mg /ml 0,05 mg/ml 22±2 % 23±2 % 24±3 % 25±3 % Os resultados demonstraram que nessas condições o AZT não mostrou-se efetivo sobre a membrana celular dos neutrófilos. Efeitos que podem ser alterados por modificação das condições de ensaio, substituição do tampão, tempo de exposição do fármaco com as células, ou ainda pela avaliação de outras células fagocíticas como os macrófagos. Para melhor visualização do funcionamento e efeitos sobre sistema fagocítico deve-se estabelecer ensaios que simulem a atividade dessas células em presença ou não das diferentes concentrações do AZT e assim verificar os possíveis efeitos citotóxicos sobre esse sistema. Conclusões Verificou-se que nessas condições de ensaio que o AZT não teve efeitos significativos sobre os LPMN, mas novos ensaios e modelos estão sendo realizados afim de elucidar os efeitos do AZT sobre os fagócitos. Referências : 1. Castro, R.M.., Garcia, A.A., Toledo, L.P., Sánchez, V., Soto, Y.T., Suárez, C.L., Evaluación de la función opsono fagocítica de los neutrófilos en pacientes infectados por el VIH. Rev Cubana Hematol Inmunol Hemoter v.18 n.1 Ciudad de la Habana ene.-abr. 2002. 2. Gianomma, G.; Cavallaro, G.; Pitaressi, G. Studies of macromolecular prodrugs of zidovudine. Adv. Drug Del. Rev., v.39, p.153–164, 1999 3. Peçanha, E.P., Antunes, O.A.C., Estratégias faramcológicas para terapia antiAIDS, Rev. Quim. Nova, v.25, n.6. , 2001. 4. Thomas N.S.; Panchagnula, R. Transdermal delivery of zidovudine: effect of vehicles on permeation across rat skin and their mechanism of action. Eur. J. Pharm. Sci., v.18, p.71-79, 2003.