Ensaio de Infecciosidade Aula Prática Ygara Mendes 2011/2 Modelo Celular e Modelo Viral VERO fibroblasto de rim de macaco verde africano YFV Yellow Fever Virus Ciclo de Infecção dos Flavivírus Metodologia Diluição Seriada (10x) 450 L 50 L 100 Estoque de vírus DMEM meio de cultura 50 L 10-1 10-2 500 L 50 L 10-3 50 L 10-4 = 50 L 10-5 10-1 50 L 50 L 10-6 10-7 Diluição Seriada 200 L 10-1 10-2 10-3 controle mock 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-4 10-5 10-6 10-7 Durante a “adsorção”... Temperatura: 37°C Tempo: 30 – 60 min. CORRIDA CONTRA O TEMPO... Mexer a cada 10-15 min. Após Adsorção... Retirar a amostra de cada poço Lavar com PBS meio semi-sólido meio semi-sólido = carboximetilcelulose (CMC) + DMEM + SFB 50% Polímero aniônico hidrossolúvel derivado de celulose - inerte 48% 2% Após 7 dias de infecção... cristal violeta Avaliando a infecção... controle 10-1 10-2 10-3 10-4 cristal violeta Como quantificar a infecção... FIM