Ensaio de Infecciosidade

Ensaio de Infecciosidade
Aula Prática
Ygara Mendes
2011/2
Modelo Celular e Modelo Viral
VERO
fibroblasto de rim
de macaco verde
africano
YFV
Yellow Fever Virus
Ciclo de Infecção dos Flavivírus
Metodologia
Diluição Seriada (10x)
450 L
50 L
100
Estoque
de vírus
DMEM
meio de cultura
50 L
10-1
10-2
500 L
50 L
10-3
50 L
10-4
=
50 L
10-5
10-1
50 L
50 L
10-6
10-7
Diluição Seriada
200 L
10-1
10-2
10-3
controle
mock
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-4
10-5
10-6
10-7
Durante a “adsorção”...
 Temperatura: 37°C
 Tempo: 30 – 60 min.
 CORRIDA CONTRA O TEMPO...
 Mexer a cada 10-15 min.
Após Adsorção...
 Retirar a amostra de cada poço
 Lavar com PBS
meio semi-sólido
meio semi-sólido = carboximetilcelulose (CMC) + DMEM + SFB
50%
Polímero aniônico hidrossolúvel derivado de celulose - inerte
48%
2%
Após 7 dias de infecção...
cristal violeta
Avaliando a infecção...
controle
10-1
10-2
10-3
10-4
cristal violeta
Como quantificar a infecção...
FIM