Slide 1 - IBA (FMRP)
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O composto E6446 poderia proteger animais de desenvolver malaria cerebral e também alterar o perfil de citocinas? iRBC (P. berghei ANKA) Sobrevivência 1 E6446 (120mg/Kg) 12 Sangue Baço - Citocinas no soro (ELISA) - Parasitemia Cultivo com LPS ou CpG - Citocinas no sobrenadante (ELISA) O composto E6446 aumenta sobrevivência dos animais infectados com malaria. Qual o efeito do E6446 nas células dendríticas de camundongos infectados com P. berghei? E6446 (120mg/Kg) via oral 6p infecção Extração do baço e obtenção celular Células dendríticas Análise da produção de citocinas pelas DC (citometria) iRBC (P. berghei ANKA) A infecção pelo Plasmodium aumenta a produção de TNF- e o tratamento com E6446 pode reduzir esta citocina produzidas pelas DC. Qual o efeito do E6446 em animais com malaria cerebral estabelecida? E6446 (120mg/Kg) ou água - via oral 3 5 7 12 – Sobrevivência iRBC (P.berghei ANKA) E6446 é eficiente no estágio inicial da malaria cerebral. Os efeitos promovidos pelo E6446 estão realmente relacionados com os receptores Toll-like endossomais? Camundongos 3d Mutação UNC93B1 Akira, S. Takeushi, O. 2010. Os efeitos promovidos pelo E6446 estão realmente relacionados com os receptores Toll-like endossomais? Camundongos 3d Mutação UNC93B1 iRBC (P. berghei ANKA) Perfil de citocinas (Citometria) Sobrevivência Parasitemia Os camundongos deficientes na resposta para TLR3, 7 e 9 apresentaram resultados semelhantes aos obtidos por animais infectados e tratados com E6446. O tratamento de camundongos com E6446 pode atenuar os sintomas da malária cerebral? E6446 (120mg/Kg) ou água - via oral 12 12d Tempo de infecção Score clínico Desequilibrio - 6 Paralisia - 8 Coma,convulsão e morte - 10 7d iRBC (P.berghei ANKA) 200l A.evans (1%) 1h depois Morte e retirada do cérebro Análise cerebral O tratamento com E6446 de camundongos infectados com malaria significativamente diminuiu os focos de derrame cerebral. Conclusão... O composto E6446 Não altera a parasitemia nos animais; Inibe a ativação de TLR endossomais (7 e 9); Reduz a responsividade dos TLRs ativados em animais com malaria; Reduz a produção de citocinas tais como IFN-γ, TNF-α, IL-6; Aumenta a sobrevida de camundongos infectados com malaria; Atenua os sintomas de malaria cerebral. O E6446 atua como antagonista de TLR sensíveis a ácidos nucleicos (endossomais) e pode ser uma alternativa para prevenção de malaria cerebral. Pressão seletiva: Proteção contra Malária Grave x Efeitos deletérios • Polimorfismo FCγRIIB Deficiência + Comum em Africanos, relacionado com LES em descendentes fora da Africa; • Willcocks et al. (2010) – Crianças africanas que possuíam proteção contra malária grave, possuíam alguma perda de função nesse receptor Será que a susceptibilidade ao LES está relacionada à proteção frente às formas graves da Malária? Camundongos com predisposição ao LES são protegidos contra a forma cerebral de Malária? WT ou FCγRIIB -/- .Yaa I.P. 1x106 P. berghei % Sobrevivência, Parasitemia Camundongos com predisposição ao LES são protegidos contra a forma cerebral de Malária? Kidney Inflammation WT ou FCγRIIB -/- .Yaa I.P. 1x106 P. berghei WT Brain Pathology Peso órgão, Score Clinico Os animais propensos ao LES sobrevivem por mais tempo, resistem à parasitemias maiores e não apresentam sinais de edema cerebral Brain Camundongos com predisposição ao LES também são protegidos contra a forma não cerebral de Malária? WT ou FCγRIIB -/- .Yaa I.P. 1x104 P. yoelii % Sobrevivência, Parasitemia Camundongos propensos ao LES não são protegidos no caso de malária grave não cerebral O aumento da expressão de TLR7 ou a deficiencia de FCγRIIB protegem contra a forma cerebral de Malária de forma independente? WT, TLR7.tg ou FCγRIIB -/- I.P. 1x106 P. berghei % Sobrevivência, Parasitemia, Score Clínico Ambos os camundongos TLR7.tg e FCγRIIB-/demonstram proteção contra as formas graves de malária Brain microhemorrhagies Qual é o perfil de produção de citocinas nos camundongos propensos ao LES? WT ou FCγRIIB -/- .Yaa I.P. 1x106 P. berghei Citocinas (soro) ELISA 172 10, 100, 150, 160, 160, 200, 220, 250, 300 9, 9, 10, 10, 11, 20, 25, 50, 200 300 200 150 100 50 50 10 o 10 o Qual é o perfil de produção de citocinas nos camundongos propensos ao LES? WT ou FCγRIIB -/- .Yaa I.P. 1x106 P. berghei Citocinas A (soro) proteção dos ELISA animais propensos ao LES provavelmente se deve aos níveis elevados de IL-10 antes, e os baixos níveis de citocinas inflamatórias após a infecção Qual o padrão celular no baço dos animais propensos ao LES? Germinal center B cells WT ou FCγRIIB -/- .Yaa Plama cells Activated B Cells Activated Helper T Cells Inducible Costimulator I.P. 1x106 P. berghei Activated T Cells 7 dias Activated Cytotoxic T Cells Características de infecção crônica controlada Quantificaçãoantes de células da infecção, presença de células Foxp3+ após, Macrophages, DC Citometria deve conferir resposta controlada CD4+ ICOS High ↑ IL-2, IL-3 e IFN-γ Qual o padrão de resposta no cérebro dos animais infectados? Quantificação de células WT ou (Citometria), FCγRIIB -/- .Yaa Real Time PCR 7 dias I.P. 1x106 P. berghei IL-10, IFN-γ, IL-6, IL-12 IL-10 M2 MØ Altos níveis de Arginase IL-12 TNF MØ Conclusão Terapias e vacinas + LES, Hb-S
